[发明专利]一种石蜡病理切片组织的水凝胶支撑和脂质清除处理方法

说明书

本发明提供一种石蜡病理切片组织的水凝胶支撑和脂质清除处理方法，包括：S1.脱蜡；S2.抗原修复；S3.浸泡于水凝胶中；S4.水凝胶凝固；S5.切片组织中的脂质清除。本发明通过水凝胶支撑切片组织中蛋白质、染色体等遗传物质并有效清除了石蜡病理切片组织中的脂质成分，以提高抗体等大分子物质及光线的透过率，达到提高抗原抗体结合率、提高抗体效价、减少抗体使用量；降低染色背景并提高靶标信号，最终实现提高石蜡病理切片检测的特异性敏感性，降低检测费用的目的。同时还具有操作难度低、对设备要求低、操作容易等优势。

技术领域

本发明涉及提高石蜡病理组织切片的检测特异性敏感性并大幅降低抗体使用量的方法，是一种石蜡病理切片组织水凝胶支撑脂质清除的处理方法。

背景技术

石蜡病理组织切片是将病变的组织或脏器经过各种化学品和包埋法的处理，使之支撑硬化，在切片机上切成薄片，粘附在玻片上，加以各种染色检测手段，供在显微镜下检查，以观察病理变化，作出病理诊断，为临床诊断和治疗提供帮助。其中，染色手段不同，可分为细胞化学染色、免疫组织化学染色和免疫荧光染色以及荧光原位杂交（FISH）等。

然而在石蜡病理组织切片中，组织细胞中脂质分子具有阻碍光线和大分子渗透的作用，这导致传统方法制作的病理切片在免疫组织染色及免疫荧光染色时需耗费更多的抗体且同时信噪比较差。如果能无损伤保留细胞蛋白质及各种遗传物质同时有效去除双层脂质分子，从而使光线和大分子能更好渗透到组织深层，实现提高染色效果并减少抗体的使用量，提高组织石蜡病理组织切片染色的敏感性、特异性。因此如何能在去除脂质的同时保持组织结构完整性和避免生物分子信息丢失成为技术难点。

CLARITY技术的原理是采用一种透明水凝胶替代组织中的脂类，构建起一个组织细胞骨架，支撑细胞组分中的蛋白质、神经递质、DNA、RNA等物质，从而达到减少脂质分子阻碍光线和大分子渗透的目的。该技术最初的报道是运用在动物器官组织，主要是通过心脏灌流输入动物体内，在多聚甲醛充分支撑蛋白质、核酸之后，将组织样品升温至37℃，诱发丙烯酰胺、甲叉-丙烯酰胺聚合，在组织内部形成水凝胶，完整保留蛋白质和核酸的定位信息，再进一步应用阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠（SDS）溶液清除样品中主要的散光物质磷脂，最后通过折射率匹配，让样品和样品间隙的折射率一致，从而使样品的光学通透性大大增强。然而在石蜡病理切片组织中运用CLARITY技术原理进行水凝胶支撑脂质清除处理，国内外尚未见文献报道。

发明内容

本发明提供一种石蜡病理切片组织的水凝胶支撑和脂质清除处理方法，将CLARITY技术原理与传统石蜡切片检测方法相结合，通过支撑组织中蛋白质及各种遗传物质并清除组织中的脂质成分，提高病理切片检测的特异性和敏感性，并大幅降低抗体使用量。

为实现上述目的，本发明的技术方案为：

一种石蜡病理切片组织的水凝胶支撑和脂质清除处理方法，包括以下步骤：

S1.将石蜡病理组织切片进行脱蜡，得切片；

S2.将切片进行抗原修复；

S3.将步骤S2所得的切片完全浸没于水凝胶中，在0~4℃下浸泡20~40h；

S4.将步骤S3处理后的切片放入第一容器中，交替充入惰性气体/氮气/二氧化碳和抽真空，然后在第一容器充满惰性气体/氮气/二氧化碳的情况下，于35~40℃保温2.5~6h，直至水凝胶凝固；

S5.将步骤S4处理后的切片放入盛有清除液的第二容器中，置于摇床上，35~40℃下去除切片组织中的脂质22~30h，最后将切片取出，完成透明化处理过程。

优选的，所述步骤S1包括以下子步骤：

S1-1.将石蜡病理组织切片置于恒温箱中，于55~65℃保温30~60min；