[发明专利]新品种半滑舌鳎的分子选育方法

权利要求书

1.新品种半滑舌鳎的分子选育方法，其特征在于新品种半滑舌鳎按以下步骤选育：

一、根据新品种的设计需求，挑选表型性状符合要求的半滑舌鳎作为亲本，表型性状挑选公式为，公式中Xn为亲本的表型性状测定值，为半滑舌鳎群体表型性状的平均值，S为半滑舌鳎群体表型性状的标准差；

二、检测分析亲本间的遗传组成，a.提取亲本基因组DNA，采用常规酚-氯仿抽提的方法或者使用基因组DNA纯化试剂盒；b.用20对微卫星标记引物对亲本基因组DNA分别进行PCR扩增，每对微卫星标记引物的PCR扩增反应总体积为15L，包括10.8L反应缓冲液、100ng亲本个体基因组DNA、0.6μL微卫星标记上下游引物、0.5U TaqDNA聚合酶和余量的灭菌超纯水；其中反应缓冲液含有终浓度10 mmol/L Tris-Cl、50 mmol/L KCl、1.5 mmol/L MgCl₂、200µmol/L dNTP和余量的超纯水；c.将PCR扩增产物进行凝胶电泳检测，获得产物条带图片，PCR扩增产物凝胶电泳检测过程为：PCR扩增产物先使用8%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳2-3小时，之后将凝胶染色10分钟，然后显色5-10分钟，将凝胶扫描或照相获得产物条带图片；所述的染色用染色液为0.1%硝酸银溶液，所述的显色用显色液每升含有20g的NaOH、0.4g的Na₂CO₃和4mL的甲醛溶液；d.利用凝胶图像分析软件，将PCR扩增产物电泳条带图片转化成数字信息数据；e.将数字信息数据导入遗传分析软件，计算获得亲本间的遗传组成；

步骤b中选用的20对微卫星标记引物的序列为：

微卫星标记引物（1） 上游引物：gggagtcaacaaccaaacca

下游引物：cactcgcaaagactgaggtg

微卫星标记引物（2） 上游引物：actgcgtccaaactgaggag

下游引物：cattccccactcactgtcct

微卫星标记引物（3） 上游引物：tcctgtgggaggagaggaga

下游引物：acacacctgcacacaccagt

微卫星标记引物（4） 上游引物：ccatccgagaccttcagtgt

下游引物：acctgctcctcctctgtgag

微卫星标记引物（5） 上游引物：acaaagctgcgttcctatcg

下游引物：ggatcctgcctttggtttct

微卫星标记引物（6） 上游引物：atcgaggaggatctgtgtgg

下游引物：gcgtgagatgcaagaaaaca

微卫星标记引物（7） 上游引物：tgcagcgcacattacctaac

下游引物：ggcacgctgaagctttaca

微卫星标记引物（8） 上游引物：cgttgccatcacacaatttc

下游引物：caacgtgcatcgtgtctctt

微卫星标记引物（9） 上游引物：tgtgaagtcatgtggttctg

下游引物：tgagttggttgtatgtcctg

微卫星标记引物（10）上游引物：ggctgcctacaaacctcaac

下游引物：gaggactcagatgcacacga

微卫星标记引物（11）上游引物：gtttccttcctttcattcct

下游引物：gaaatggacgtctgtgattt

微卫星标记引物（12）上游引物：cacaaaattgctgcttgcat

下游引物：aacactccaaccccaggtaa

微卫星标记引物（13）上游引物：ctgccgtgatcttcacaaaa

下游引物：tccactgggacaagaaaaca

微卫星标记引物（14）上游引物：ctgtgaccctcctcctgct

下游引物：ctccatgctgccagtgttt

微卫星标记引物（15）上游引物：aaagaggcgtgtcatcggtt

下游引物：cccaatcgctcaagaaatcc

微卫星标记引物（16）上游引物：taccacgctgccttcaaatg

下游引物：ttcaccactgttctgctccac

微卫星标记引物（17）上游引物：gacgaaggtttttgaatggtta

下游引物：gtgaggcacaggcttttgga

微卫星标记引物（18）上游引物：tccgacccacagttgtatca

下游引物：taaacagatctgctgcagtgagt

微卫星标记引物（19）上游引物：tcatcagcccagttcaaagt

下游引物：ctacctctgcttcagctgtg

微卫星标记引物（20）上游引物：tctttaccgagaatctccctcc

下游引物：aaagggcctaccgaaagaat

三、根据遗传组成，选择亲本间的遗传距离0.7～1.0作为“阈值”范围进行配组，亲本分成2个或2个以上繁殖群体；

四、繁殖群体内亲本自由组合交配，生产、培育子代半滑舌鳎至性成熟；

五、以子代半滑舌鳎为新一代亲本，重复操作步骤一至四，直到达到新品种半滑舌鳎性状的设计要求，即得到新品种半滑舌鳎。