[发明专利]检测基因片段缺失的试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.检测基因片段缺失的试剂盒，其特征在于，该试剂盒组成包括：检测目的基因片段扩增产物的探针，目的基因片段扩增引物，反应酶系和缓冲液。

2.根据权利要求1所述的检测基因片段缺失的试剂盒，其特征在于：所述的检测目的基因片段扩增产物的探针长度为35～45bp；由两个子探针经四氢呋喃连接而成，还包括荧光素基团和荧光淬灭基团，所述荧光素基团和荧光淬灭基团位于四氢呋喃两端的T碱基上，荧光素基团和荧光淬灭基团间相距2-10个碱基。

3.根据权利要求1或2所述的检测基因片段缺失的试剂盒，其特征在于：所述的荧光素基团为6-羧基荧光素、四氯-6-羧基荧光素、六氯荧光素、羧基-4',5'-二氯-2',7'-二甲氧基荧光素或罗丹明类荧光素中的至少一种；所述的荧光淬灭基团为黑孔淬灭基团1、黑孔淬灭基团2或4-(4’-二甲基氨基偶氮苯基)苯甲酸中的至少一种。

4.根据权利要求1～3任一项所述的检测基因片段缺失的试剂盒，其特征在于：所述的检测目的基因片段扩增产物的探针3’端采用C3-spacer修饰。

5.根据权利要求1～4任一项所述的检测基因片段缺失的试剂盒，其特征在于：所述的目的基因片段扩增引物核苷酸长度为35～50bp。

6.根据权利要求1～5任一项所述的检测基因片段缺失的试剂盒，其特征在于：所述的目的基因片段扩增引物序列与探针序列在目的基因片段上不产生重叠，至少相距3bp以上。

7.根据权利要求1～6任一项所述的检测基因片段缺失的试剂盒，其特征在于：所述的目的基因片段扩增引物扩增目标序列长度为100～200bp。

8.根据权利要求1～7任一项所述的检测基因片段缺失的试剂盒，其特征在于：所述的反应酶系包括：150ng/uL RecA重组酶蛋白，90ng/uL SSB单链结合蛋白，50ng/uL klenow聚合酶和50U核酸外切酶Ⅲ。

9.根据权利要求1～8任一项所述的检测基因片段缺失的试剂盒，其特征在于：所述的缓冲液包括：200mmol/L醋酸镁，5％聚乙二醇，5mmol/L二硫苏糖醇，3～5mmol/L ATP,2～5U磷酸肌酸激酶和300uM dNTP。

10.采用权利要求1～9任一项所述的试剂盒检测基因片段缺失的方法，包括以下步骤：

a、提取目的基因；

b、目的基因中加入目的基因片段扩增引物，检测目的基因片段扩增产物的探针，重组酶和缓冲液，于37～42℃下进行扩增反应10～20min。