[发明专利]一种抑菌棉片及其在食用菌菌种组织分离或纯化中的应用

说明书

本发明公开了一种抑菌棉片及其在食用菌菌种组织分离或纯化中的应用，其是将小孔径海绵剪切成直径6 mm、厚1 mm的圆形海绵片，经灭菌后在海绵片中滴加含链霉素、庆大霉素及卡那霉素的无菌抗生素溶液，常温晾干，制得每片含200μg链霉素、100μg庆大霉素以及100μg卡那霉素的抑菌棉片，然后将其用于食用菌菌种的组织分离或食用菌母种的纯化。本发明可极大的提高食用菌菌种组织分离及纯化的成功率，具有极大的应用推广价值。

技术领域

本发明属于食用菌及生物技术领域，具体涉及一种抑菌棉片及其在食用菌菌种组织分离或纯化中的应用。

背景技术

食用菌是一类具有极高营养和药用价值的大型真菌，广泛分布于不同自然生境。由于野生食用菌产量极其有限，不能满足人们对食用菌不断增长的需求。因此，食用菌人工栽培已成为一种必然要求。目前食用菌栽培主要利用农业、林业、食品业等生产中所产生的废弃物，如木屑、棉籽壳、甘蔗渣、稻草、麦秆、酒渣、茶渣等作为主要栽培原料，并添加麸皮等有机氮源。由于这些原料来源广泛，价格低，且均为可再生原料，因此食用菌栽培属可持续发展产业。此外，食用菌栽培过程可实现废弃物的再利用，还可减少其对环境的破坏作用，因此，食用菌栽培不仅具有重要的经济效益且具有良好的社会效益，具有巨大的发展空间。

食用菌菌种是食用菌栽培的基础。食用菌菌种分离主要有组织分离法、基质分离法以及孢子分离法，其中以组织分离法应用最为普遍，已广泛应用于野生食用菌菌种的分离以及优良菌种的选育。组织分离法是以食用菌子实体内部少量组织作为接种物进行培养，实现菌种分离的目的，但由于食用菌组织通常有不同程度的细菌污染，易导致菌种分离失败。因此，食用菌组织分离时为防止细菌污染，通常在培养基中添加单一抗生素如青霉素、链霉素等，以抑制污染细菌生长。但抗生素不耐热，通常须在融化的培养基温度降至约60-70℃时加入，因此使制备过程更为繁琐。此外，培养基中含较高浓度的抗生素也可能对食用菌的生长造成影响。

另外，食用菌菌种（包括母种、原种及栽培种）的制备、操作及培养过程中极易发生细菌污染，尤其是生产中广泛使用的食用菌母种，其在转管操作和保藏过程中易发生细菌污染，因此，食用菌工作者通常需要对所污染菌种进行纯化操作，以提高菌种纯度。但目前大多数菌种纯化操作步骤繁琐，成功率低。因此，针对食用菌菌种组织分离和纯化过程中存在的问题，有必要开发一种使用方便、能有效抑制污染细菌且不影响食用菌生长的方法，以改进食用菌菌种组织分离和纯化步骤，大幅提高菌种分离和纯化的成功率。

发明内容

本发明的目的在于提供一种抑菌棉片及其在食用菌菌种组织分离或纯化中的应用。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种抑菌棉片，其是将孔径为120 ppi的小孔径海绵剪切成直径6mm、厚1mm的圆形海绵片，将其灭菌后，在其中滴加含链霉素、庆大霉素及卡那霉素的无菌抗生素溶液，常温晾干制得；每片绵片中含链霉素200 μg、庆大霉素100 μg、卡那霉素100 μg。

所述抑菌棉片在食用菌菌种组织分离中的应用方法为，在食用菌菌种组织分离时，将抑菌棉片放置于斜面培养基表面（其表面残留水分应尽可能少），将黄豆粒大小的食用菌子实体内部组织块置于距抑菌棉片边缘3-5mm处的培养基上，然后恒温进行培养，待菌落长至直径6cm大小时，用接种钩挑取菌落边缘含培养基的尖端菌丝进行转管培养，即获得组织分离种。

所述抑菌棉片在食用菌菌种纯化中的应用方法为，在食用菌母种纯化时，挑取绿豆粒大小的细菌污染母种至斜面培养基表面（其表面残留水分应尽可能少），在距其3-5mm处放置抑菌棉片，然后恒温培养至菌落直径为3-5cm时，再进行转管培养，即获得纯化的母种。

本发明的有益效果在于：

（1）本发明提供的抑菌棉片中所含的抗生素在培养基中有扩散作用，可抑制污染细菌的生长，且在斜面培养基上，随距离的增加，抗生素浓度下降，对食用菌菌丝体的生长基本无影响。