[发明专利]一种海带多糖‑铬配合物的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种海带多糖-铬配合物的制备方法，其特征在于：海带多糖与铬在一定条件下自组装反应形成配合物，具体包括如下步骤：

（1）海带粗多糖的提纯

（A）胰蛋白酶液的制备：取1g胰蛋白酶，用pH5.8的NaHPO₃-NaH₂PO₃缓冲液溶解，精确定容至100ml，酶液终浓度为l0mg/ml，pH5.98；

（B）取100ml浓度为100mg/ml的海带粗多糖液和40ml的胰蛋白酶液混合，37℃水浴5h后加入28ml pH7.0的10wt％H₂O₂溶液反应过夜，次日，加入42ml的sevage溶液，放在磁力搅拌仪上剧烈震荡20min，装入离心管中以4000r/min破乳后倒入分液漏斗中静置分层，弃去下层有机相及中间蛋白质层，再取上层水相加入42ml sevage溶液，重复以上操作直至中间界面无杂蛋白为止；

（C）在步骤（B）去蛋白后的多糖滤液中加入两倍体积量的无水乙醇，静置12 h后倒入离心管以3500 r/min的转速离心10min后取沉淀，沉淀分别用95wt％的乙醇、无水乙醇、丙酮各清洗3遍，醇沉洗涤后滤渣加适量蒸馏水，充分复溶后移入透析袋中，放入蒸馏水中透析24 h，透析完毕后向糖液中加入两倍体积量的乙醇醇沉，离心取其沉淀部分同样用乙醇和丙酮洗涤后放入冷冻干燥机中干燥，干燥后得海带多糖纯品；

（2）海带多糖-铬配合物的制备

取2.0 g纯化后的海带多糖溶于100ml 去离子水，70℃水浴，边搅拌边滴加1mol/L CrCl₃溶液，滴至有浑浊出现，再滴加3-5滴后即停止滴加，滴加过程中维持溶液的pH9，然后让反应液继续70℃水浴保温1h，取出反应液，冷却至室温后倒入离心管中以6000r/min转速离心8min，取上清液，加入两倍体积量95wt%乙醇一段时间后再次离心，取沉淀，沉淀用无水乙醇、丙酮洗涤后冷冻干燥，得到海带多糖-铬配合物的粗品；

（3）海带多糖-铬配合物的纯化

将海带多糖-铬配合物粗品用少量去离子水完全溶解后装入透析袋除盐，透析24h后，取出透析袋内的溶液并加入两倍体积量的95wt%乙醇，放置一段时间使海带多糖-铬配合物充分析出后离心，收集沉淀，用无水乙醇、丙酮洗涤，最后冷冻干燥得到纯化后的海带多糖-铬配合物。

2.如权利要求1所述的制备方法制得的海带多糖-铬配合物，其特征在于：纯化后的海带多糖-铬配合物中Cr元素的含量为4.2wt%。

3.如权利要求2所述的海带多糖-铬配合物在制备抗衰老、免疫调节剂的药物和保健食品中的应用。