[发明专利]PCT荧光微球免疫层析检测试剂卡及其制备方法

权利要求书

1.一种PCT荧光微球免疫层析检测试剂卡，包括底板（1），所述的底板（1）上依次衔接有样品垫（2）、结合垫（3）、包被膜（4）和吸收垫（5），其特征在于，所述的结合垫（3）喷涂有两种不同粒径荧光微球标记的PCT抗体，以及荧光微球标记的鸡IgY；所述的包被膜（4）T线位置包被有抗PCT抗体，C线位置包被有羊抗鸡IgY。

2.根据权利要求1所述的一种PCT荧光微球免疫层析检测试剂卡，其特征在于，所述的两种不同粒径荧光微球是粒径为100nm荧光微球和300nm荧光微球。

3.根据权利要求1或2所述的一种PCT荧光微球免疫层析检测试剂卡，其特征在于，所述的粒径为100nm荧光微球和300nm荧光微球的比重为5:1~7:1。

4.制备权利要求所述的一种PCT荧光微球免疫层析检测试剂卡的方法，在底板上依次衔接有PVC底板、样品垫、结合垫、硝酸纤维膜和吸水纸，其特征在于，所述的结合垫采用下述方法依次制得的：

1）制备100nm荧光微球标记抗PCT抗体

在1mL 0.1M pH6.0的4-羟乙基哌嗪乙磺酸中加入100nm粒径的荧光微球和抗PCT抗体，两者比重为1:5~1:20；加入 10mg/mL的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐溶液，室温反应30min，16000rpm离心30min，去上清，加入保存液，超声混匀；

制备300nm荧光微球标记抗PCT抗体

在1mL 0.1M pH6.0的4-羟乙基哌嗪乙磺酸中加入300nm粒径的荧光微球和抗PCT抗体，两者比重为1:10~1:50；加入 10mg/mL的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐溶液，室温反应30min，16000rpm离心30min，去上清，加入保存液，超声混匀；

制备荧光微球标记鸡IgY抗体

在1mL 0.1M pH6.0的4-羟乙基哌嗪乙磺酸中加入荧光微球和鸡IgY，两者比重为1:5~1:20；加入 10mg/mL的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐溶液，室温反应30min，16000rpm离心30min，去上清，加入保存液，超声混匀；

将上述步骤1）和步骤2）所制备的100nm、300nm粒径荧光微球按重量比5:1~7:1混合，混合后离心去上清，用添加了0.1%SDS、1%BSA和0.5%PEG20000的0.1M 3-(N-吗啉基)-2-羟基丙磺酸复溶，得混合标记液，混合后的标记液与步骤3）荧光微球标记鸡IgY抗体按照重量比20:1混合，用喷金划膜仪喷至聚酯纤维素膜上，喷量为3μL/cm，放入37℃烘箱，干燥8小时。

5.根据权利要求4所述的一种PCT荧光微球免疫层析检测试剂卡的制备方法，其特征在于，所述的包被膜的制备方法是反应膜上T线位置包被的是抗PCT抗体，C线位置包被的是羊抗鸡IgY。

6.根据权利要求4所述的一种PCT荧光微球免疫层析检测试剂卡的制备方法，其特征在于，所述的样品垫的制备方法将样品垫裁成20mm×300mm的大小，浸泡在样品垫缓冲液中，1小时之后取出，于室温干燥16-18小时；所述的样品垫缓冲液配方如下：2%L-山梨糖、0.5% S9和0.1mg/mL兔抗人红细胞抗体溶解于0.2M PB pH7.4缓冲液中。

7.根据权利要求4所述的一种PCT荧光微球免疫层析检测试剂卡的制备方法，其特征在于，所述的荧光微球的固含量1%。

8.根据权利要求4所述的一种PCT荧光微球免疫层析检测试剂卡的制备方法，其特征在于，所述的保存液为：10%蔗糖、1.5%BSA溶解于0.1M Gly-NaOH溶液中。