[发明专利]PCT荧光微球免疫层析检测试剂卡及其制备方法

说明书

技术领域

本发明公开了一种检测卡，具体涉及一种PCT荧光微球免疫层析检测试剂卡，本发明还是涉及该PCT荧光微球免疫层析检测试剂卡的制备方法。

背景技术

降钙素原（Procalcitonin, PCT）是一个小分子蛋白，分子量约为13kDa，通常由甲状腺的C细胞产生。PCT现已被看作是伴随有全身性炎症和败血症的主要标志物。

PCT由CALC-1基因编码，是降钙素的前体。PCT来源于降钙素原前体，后者由141个氨基酸组成，去除信号肽（1-25位氨基酸）后得到含有116个氨基酸残基的PCT，PCT经过连续的裂解，最终形成三个分子，分别是N端片段（N端PCT，57个氨基酸残基），降钙素（32个氨基酸残基）和抗钙素（21个氨基酸残基）。

1993年，有报道发现PCT水平在细菌系统感染患者中有所升高（1）。经证实，与炎症相关的PCT并非由甲状腺C细胞产生，而是由所有薄壁组织和已分化类细胞产生（2-4）。PCT是一种很理想的细菌感染标志物，因为它在正常人中浓度非常低，而病毒性感染只会使PCT浓度略微升高。此外，PCT更重要的诊断价值在于它的浓度与炎症的严重程度密切相关。

除了炎症或败血症能引起PCT升高外，手术、多处创伤、高温休克、烧伤和心源性休克有时同样可以导致PCT浓度的升高。此外，多项研究已证实心脏手术或心脏移植后PCT水平监测的重要性，PCT的改变可以用来鉴别急性排斥反应和由细菌或者真菌引起的感染。

在正常及健康的个体中，其血清浓度极低，仅为10-50pg/mL，一般方法检测不到。在 全身性细菌、真菌及寄生虫感染，系统炎症反应综合症、败血症、急慢性肺炎、急性胰腺炎、 活动性肝炎、创伤等患者的血清PCT水平异常增高，其浓度比正常水平大几倍甚至上万倍； 其在病毒感染，自身免疫性疾病，器官移植排除反应等患者血清中的浓度不增高或轻微增 高。这现象决定了PCT的高度特异性，因此可用于此类疾病的鉴别诊断，在全身性细菌感染 和脓毒症辅助鉴别诊断、预后判断、疗效观察等方面有很高的临床价值，可广泛用于ICU病 房、血液科、外科、内科、器官移植科、治疗实验室等。 目前PCT在医院和血液系统广泛使用标记免疫分析技术是放射免疫分析(RIA)和酶免疫分析(EIA)，但在实际应用中存在以下缺陷：放射免疫分析的放射性核素污染；酶联免疫的酶的活性容易失活，酶的大分子标记容易影响被标记物的空间结构。

免疫层析(Lateral Flow Immunoassay，LFIA)技术是近几年来国内外兴起的一种快速诊断技术。LFIA以硝酸纤维素膜( NC膜 )为载体，先将特异的抗体(抗原 )固定于NC膜的某一区带，当膜条一端滴加样品(尿液或血清 )后，由于毛细管作用，样品将沿着该膜向前 移动，当移动至固定有抗体(抗原 )的区域时，样品中相应的抗原(抗体 )即与该抗体发生特 异性结合，用免疫胶体金等染色可使该区域显示一定的颜色，从而实现特异性的免疫诊断。目前的LFIA快速检测试剂盒多以胶体金、彩色乳胶颗粒或者荧光素作为标记物。 基于胶体金标记技术开发的快速检测产品，存在灵敏度低、主要应用于定性或者半定量、批间差异较大等问题；基于彩色乳胶颗粒虽然批间差异有所改善，但灵敏度依然较低，也只能说明定性或半定量；基于荧光素标记技术的免疫层析灵敏度得到很大提高，能进行定量检测，但是由于样本中含有较高的荧光本底信号，且stock位移较小，会对检测产生较大的影响。时间分辨荧光(Time-resolved Fluorescence，TRF )是一种非同位素荧光标记物， 与普通荧光相比，具有stock位移大，荧光寿命长等特点，可以有效的避免样品中的本底荧光，以及激发光等杂散光的影响，因此相比普通的荧光具有更高的灵敏度和抗干扰能力。

中国专利ZL 201610031801.3 公开了一种时间分辨荧光定量检测 PCT 的试剂盒 ，但是该试剂盒对荧光微球抗体复合物制备要求高，-80℃低温和需要冻干，检测灵敏度低，仅0.1ng/mL，并且只能仅检测血清，检测时间长，需要20分钟。

发明内容

针对上述问题，本发明的目的是提供一种操作方便，可以同时检测出低浓度和高浓度的PCT抗原，并且检测结果可靠的PCT荧光微球免疫层析检测试剂卡。

本发明的另外一个目的是提供上述检测试剂卡的制备方法。

为此，本发明提供的第一个技术方案是这样的：