[发明专利]绵羊精液高倍低温稀释保存液及制备方法

说明书

技术领域

本发明属于动物繁殖技术领域，具体涉及一种用于延长绵羊精液储存时间的绵羊精液高倍低温稀释保存液及制备方法。

背景技术

羊人工授精采用的精液主要有两种，即新鲜精液和冷冻精液，前者常简称为鲜精，后者简称为冻精。为提高种公羊的利用率，一些种羊场及家畜改良工作站常制作冻精，用于羊的配种工作。但生产冻精的设备昂贵，精液解冻技术要求较高，并且受胎率较低。生产中常常采用鲜精进行输精，鲜精经过稀释后延长保存时间，可以有效的提高种公羊利用率。目前，优良种公羊数目有限，但绵羊鲜精高倍稀释保存液品种较少，且鲜精保存时间短，严重阻碍着绵羊精液的利用率。

发明内容

本发明的目的在于克服上述的缺陷，提供一种绵羊精液高倍低温稀释保存液及制备方法，它能够使绵羊精液高倍稀释后在低温长时间保存，并不影响精子的活力及受精率，有效的提高了种公羊精液的利用率。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的；一种绵羊精液高倍低温稀释保存液，其特征在于：它包括以下组份：

(1)配制A液

调整PH值至6.50±0.2，混匀后过滤，再加入20ml卵黄，混匀后，置于4℃冰箱保存；

(2)配制B液

调整PH值至6.50±0.2，混匀后过滤，再加入20ml卵黄和10％甘油，混匀后，置于4℃冰箱保存。

一种绵羊精液高倍低温稀释保存液的制备方法，其特征在于：它包括以下步骤：

一、配制试剂

(1)配制A液

调整PH值至6.50±0.2，混匀后过滤，再加入20ml卵黄，混匀后，置于4℃冰箱保存；

(2)配制B液

调整PH值至6.50±0.2，混匀后过滤，再加入20ml卵黄和10％甘油，混匀后，置于4℃冰箱保存；

二、精液检测

选取身体状态较好，性欲旺盛的种公羊，使用假阴道法采精，精液为乳白色，无异味，镜下检测活力，并检测精液密度；

三、精液稀释

稀释前将A液放置室温，B液放置2-8度平衡，上述步骤二的精液检测后，先用A液将精液稀释，放入2-8度低温平衡3小时后，再加入等体积的B液，混匀后，2-8度低温保存。

本发明的优点和有益效果是：能够使绵羊精液高倍稀释后在低温长时间保存，并不影响精子的活力及受精率，有效的提高了种公羊精液的利用率。

具体实施方式

实施例1：一种绵羊精液高倍低温稀释保存液的制备方法，它包括以下步

骤：1、配制试剂

(1)配置A液

调整PH值至6.50±0.2，混匀后过滤，再加入20ml卵黄，混匀后，置于4℃冰箱保存；

(2)配置B液

调整PH值至6.50±0.2，混匀后过滤，加入20ml卵黄和10％甘油，混匀后，置于4℃冰箱保存；

(3)配制FITC-PNA

称取1mg的FITC-PNA，(sigma公司，货号L7381)，加入10mlPBS(Gibco公司，货号14190)，将其配成0.1mg/ml浓储液，溶解好的浓储液分装后，使用锡箔纸包好储存在-20℃；

(4)PI配制

称取10mg的PI(sigma公司，货号P4170)，加入20ml生理盐水，将其配成0.5mg/ml浓储液，溶解好的浓储液分装后，使用锡箔纸包好储存在-20℃；

(5)福尔马林配制

甲醛溶液与水按照3:7的比例混合；

2、精液检测

选取身体状态较好，性欲旺盛的种公羊，使用假阴道法采精，精液为乳白色，无异味，镜下检测活力为65％，检测精液密度为13亿/ml，共1.2ml；

3、精液稀释

稀释前将A液放置室温，B液放置4度平衡，上述步骤2的精液检测后，先用78ml的A液将精液稀释为2000万/ml，放入4度低温平衡3小时后，再加入78ml的B液，混匀后，4度低温保存；

4、检测

(1)精子活力检测

精子活力是判断精子是否能够输精的第一标准，因此精液是否可以输精要先观察精液的活力，输精时精子的活力最低也要在50％以上。