[发明专利]一种(R)-1-(2-三氟甲基苯基)乙醇的生物制备方法

说明书

本发明公开了一种(R)‑1‑(2‑三氟甲基苯基)乙醇的生物催化制备方法，所述方法为：以白地霉ZJPH1704经发酵培养获得的湿菌体为生物催化剂，以2‑三氟甲基苯乙酮为底物，在pH 5.8～8.0的磷酸缓冲液中，于25～40℃、200rpm条件下进行生物还原反应，反应结束后，将反应液分离纯化，获得(R)‑1‑(2‑三氟甲基苯基)乙醇；本发明方法底物浓度为10mmol/L时，产物(R)‑1‑(2‑三氟甲基苯基)乙醇的产率为92.31％，e.e.值99％，表现出更优的催化效率。与已报道的转化菌株相比，本菌株催化转化底物2‑三氟甲基苯乙酮转化为产物的立体选择性和产率均较高。

(一)技术领域

本发明涉及一种(R)-1-(2-三氟甲基苯基)乙醇的生物制备方法。

(二)背景技术

GSK461364(Ⅲ)的化学结构式为：

5-[6-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]-1H-苯并咪唑-1-基]-3-[(1R)-1-[2-(三氟甲基)苯基]乙氧基]-2-噻吩甲酰胺(GSK461364，Ⅲ)是一种Plk1激酶抑制剂。Plk1激酶抑制剂是一类新型的具有良好应用前景的癌症治疗药物，其与传统微管蛋白抑制剂类抗癌药物(紫杉醇、长春新碱)相比具有更好的选择性、耐受性和临床应用优势。

式(IV)为2-三氟甲基苯乙酮，式(V-a)为(S)-1-(2-三氟甲基苯基)乙醇，式(V-b)为(R)-1-(2-三氟甲基苯基)乙醇。

(R)-1-(2-三氟甲基苯基)乙醇(V-b)是合成GSK461364的重要手性中间体。目前(R)-1-(2-三氟甲基苯基)乙醇的合成方法有化学法和生物法两种。化学法制备(R)-1-(2-三氟甲基苯基)乙醇时大多使用化学催化剂，这些催化剂中含有不易降解的金属化合物，易对环境造成污染。如Du等(Organometallics,2014,33:974-982)采用金属钌作为催化剂，40℃反应24h，可将2.0mmol/L的2-三氟甲基苯乙酮底物转化为(R)-1-(2-三氟甲基苯基)乙醇，主产物为R型，转化率93％，e.e.值仅为53％。秉承绿色化学的理念，采用微生物全细胞作为生物催化剂，通过生物催化法制备(R)-1-(2-三氟甲基苯基)乙醇成为更好的选择。许建和等(专利CN201210423006.0)利用基因挖掘技术，对来源于耐热克鲁维酵母(Kluyveromyces thermotolerans)的羰基还原酶基因构建重组工程菌E.coli BL21(DE3)/Pet-KtCR，用于催化还原2-三氟甲基苯乙酮制备(R)-1-(2-三氟甲基苯基)乙醇，产率为2％。何军邀等以恶臭假单胞菌为生物催化剂，将10mmol/L的2-三氟甲基苯乙酮转化为(R)-1-(2-三氟甲基苯基)乙醇，产率为64％，e.e.值99％。

(三)发明内容

本发明目的是提供一种(R)-1-(2-三氟甲基苯基)乙醇的生物催化制备方法，利用白地霉ZJPH1704静息细胞作为生物催化剂，生物催化还原2-三氟甲基苯乙酮制备(R)-1-(2-三氟甲基苯基)乙醇。该方法与化学法相比具有立体选择性强、环境友好等特点。当底物浓度为10mmol/L时，产物(R)-1-(2-三氟甲基苯基)乙醇的产率为92.31％，e.e.值99％，表现出更优的催化效率。

本发明采用的技术方案是：