[发明专利]一种制备区分免疫和感染动物H9亚型禽流感疫苗株的方法及应用

说明书

本发明公开了一种区分免疫和感染动物的H9亚型禽流感疫苗株及其制备方法和应用。本发明首次用B型流感病毒的NA基因作为标签，研制出一种制备区分免疫和感染的H9新型禽流感疫苗的方法。常规的H9亚型禽流感全病毒灭活疫苗效果确实，但在血清学上无法区分免疫和感染产生的抗体，给禽流感的监测和净化带来巨大障碍。本发明成功构建的区分免疫和感染H9亚型禽流感疫苗株中，NA基因和HA基因具用很好的兼容性，表现出很好的复制和生长等生物学特性，不需要在体外的传代适应，避免了传代适应引起的抗原变异的缺点。即使续传3代，仍然保持对鸡胚低致病力和高滴度生长的特性。本发明对H9亚型禽流感的防控和净化具有重要的意义和应用价值。

技术领域

本发明属于基因工程疫苗技术领域，具体涉及一种区分免疫和感染的H9亚型禽流感疫苗株及其制备方法和应用。

背景技术

禽流感病毒属于正黏病毒科，流感病毒属。流感病毒根据抗原性不同可分为A，B，C型，其中A型流感宿主广泛(包括禽类，人，猪等)致病力较强危害巨大。B型流感仅感染人和海豹，致病力相对较低。C型流感病毒，仅在人与猪中发现。A型和B型流感的基因组可以分为PB2,PB1,PA,NP,HA,NA,M，NS共8个基因片段。宿主被感染后，可以对HA，NA， M1和NP产生大量抗体。其中HA可以直接诱导主要中和抗体。A型和B型病毒诱导的针对 HA，NA，M1和NP的四种主要抗体在血清学上无交叉反应性。根据A型流感病毒粒子的表面囊膜蛋白血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)不同，将A型流感分为众多亚型(HnNn)。截止目前HA有18种亚型，NA有11种亚型。不同亚型HA蛋白间序列同源性在40％-80％之间(Air G M.Proceedings of theNational Academy of Sciences of the United States of America, 1981,78(12):7639.Nobusawa E,et al.Virology,1991,182(2):475-485)。B型流感没有亚型之分，各个毒株基因同源性较高。根据HA的抗原性和基因型不同，B型流感病毒目前仅分为两个群，分别为Victoria群(依据B/Victoria/2/1987命名)和Yamagata群(依据B/Yamagata/16/1988命名)。禽类中几乎存在所有亚型的A型流感病毒，在病毒的储存和进化中伴有重要作用。H9N2亚型禽流感病毒广泛存在各种禽类，在养殖场里高度流行。H9亚型禽流感造成禽呼吸道疾病，引起成年蛋鸡产蛋量下降及肉鸡生长缓慢，常与其它病毒病或细菌病混合感染，可以显著增强其致死率。此外H9N2禽流感病毒也有多例直接感染人报道。更重要的是H9N2 亚型在自然界广泛存在，可为其他亚型禽流感(如H7N9，H5N1高致病性等)提供基因片段，大大加速禽流感病毒在自然界的进化，增强了对宿主的适应性，严重阻碍禽流感的防控和净化。甚至一些毒株获得H9N2基因片段后增强了对人类的适应性，给公共卫生学造成巨大潜在威胁。