[实用新型]一种基于纳米磁珠的丙型肝炎病毒NS3抗原检测试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型属于免疫学检测领域，尤其是涉及一种基于纳米磁珠的丙型肝炎病毒NS3抗原检测试剂盒。

背景技术

丙型肝炎是由丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)感染而引起的严重威胁人类健康的重大流行性传染病。全球约有2.27亿HCV感染者，我国HCV感染者在4000万以上，大约20％可以自然清除,80％发展为HCV慢性感染，10-20％的HCV慢性感染会进一步发展为慢性进行性肝病,包括肝硬化、肝细胞癌等。

丙型肝炎感染被称为“静默感染”，是一种无症状的感染。大部分病人直到出现肝硬化甚至肝癌时，才发现自己患有丙型肝炎。因此，如何早期发现和治疗这种疾病就成为一个非常重要的问题。

HCV的检测指标主要是丙肝抗体和HCV RNA。从HCV感染到丙肝抗体的检出，大约有70天的“窗口期”。HCV RNA检测具有早期、敏感和特异等特点，但检出率较低,在技术和设备上要求较高，也费时，限制了普遍应用。

HCV感染者血清中HCV抗原(HCAg)是丙肝病毒复制的一个直接标志物，大约感染一周即可出现，其平均检出时间比HCV RNA的检出时间晚一天左右，可应用于HCV感染患者的早期发现。目前，美国雅培公司研发的丙型肝炎核心抗原的检测试剂(化学发光法)用于临床；我国有两家企业研发的检测人血清中HCV核心抗原的试剂盒(ELISA)已在临床展开应用。由于HCAg NS3在血清中的浓度(102～103CID/ml)常常低于目前国内外使用最为普遍的酶联免疫吸附分析法(ELISA)的检测限(5ng/ml～1μg/ml)，使HCAg NS₃检出率受到很大限制，成为HCV抗原检测试剂开发的瓶颈。因此，迫切需要一种高灵敏度、高特异性的丙型肝炎抗原定性和定量检测试剂。

以磁性纳米微球作为固相载体建立的磁性免疫检测技术是近年来国内外重要的免疫检测技术。表面进行化学修饰的磁性微球通过共价键偶联抗体分子；其巨大的比表面积能偶联更多的抗体，并充分暴露抗体的抗原结合位点而减少位阻效应；并且，纳米磁性微球具有超顺磁性，在无外加磁场时均匀分散在溶液中，使抗原-抗体反应更加快速、高效。

HCV归属于肝炎病毒属(Hepacivirus),黄病毒科(Flaviviridae)，病毒体呈球形，为单股正链RNA病毒。HCV-RNA全长约为9.6kb，包括一个位于基因中央的开放阅读框(ORF)。该阅读框编码3000多氨基酸的前体多聚蛋白，其通过宿主和病毒的蛋白酶作用被切割成10个具有独立功能的HCV蛋白，根据功能的不同分别命名为核心蛋白Core(C)，包膜蛋白(envelope protein)1、2(E1、E2)，p7和非结构蛋白(non structural protein)NS₂、NS₃、NS_4A、NS_4B、NS_5A和NS_5B。NS3由于其酶活性涉及到病毒的复制，而成为目前抗病毒治疗的的一个重要靶点。最近，国外有报道：NS₃抗原区域具有相对保守的抗原决定簇和较高的抗原性，是目前HCV抗体诊断试剂盒的关键抗原。

丙型肝炎NS3蛋白是HCV病毒复制中重要的功能蛋白之一，具有丝氨酸蛋白酶，解旋酶和NTP酶活性。NS3/4A蛋白酶高度保守，几乎能穿过所有菌株，是HCV进行循环复制所必须的，这个区域已成为第一个直接抗病毒(DAA)治疗的靶点和抗HCV药物治疗研究的重要方向。据此研发出的NS3/4A蛋白酶抑制剂给难治性丙肝带来了希望，同时，也对在应用NS3/4A蛋白酶抑制剂(如Simprevir类药物)时，如何确切地监测患者体内病毒的变化提出了新的挑战。

现有的检测试剂盒为了满足携带方便的要求，多为一体化设计，将检测区设置于盒体内无法分离，在检测时为了减小或避免检测区的震动对测量结果产生的影响，需要将整个盒体放置于相对平整的地面以保证检测效果，且由于一体化设计的缺陷，检测区的减震处理不够充分，也会对检测结果产生影响。

实用新型内容

有鉴于此，本实用新型旨在提出一种基于纳米磁珠的丙型肝炎病毒NS3抗原检测试剂盒，以解决现有技术存在的问题。

为达到上述目的，本实用新型的技术方案是这样实现的：