[发明专利]靶向CD43的独特唾液酸糖基化的癌症相关表位的单克隆抗体

说明书

本发明涉及由以ICLC登录号ICLC PD n°16001保藏的杂交瘤细胞产生的靶向CD43独特唾液酸糖基化的癌症相关表位的单克隆小鼠抗体。此外，本发明涉及抗体，其包含含有互补决定区CDRH1，CDRH2和CDRH3的重链可变区，和含有互补决定区CDRL1，CDRL2和CDRL3的轻链可变区，其中CDRH1，CDRH2，CDRH3，CDRL1，CDRL2和CDRL3分别包含氨基酸序列GFTFSSFGMH，YISSGSGNFYYVDTVKG，STYYHGSRGAMDY，SASSSVSSMYWY，DTSKMAS和QQWSSYPPIT。另外，本发明涉及识别相同表位的抗体。

本发明涉及由以ICLC登录号ICLC PD n°16001保藏的杂交瘤细胞产生的单克隆小鼠抗体，相关抗体和结合分子及其用途。

发明背景

CD43是跨膜蛋白和限于造血谱系细胞的特异性白细胞标志物。然而，在这些细胞中，CD43在大多数外周和骨髓来源的细胞成分中广泛表达。CD43的前体形式迁移，表观分子量为54kD。在其成熟形式中，CD43是高度糖基化的，具有115至200kD的分子量。总体而言，CD4⁺胸腺细胞和单核细胞表达115kD形式，而活化的CD4⁺和CD8⁺-T细胞，B细胞，嗜中性粒细胞和血小板表达130kD形式。CD43参与多种功能，例如细胞粘附，细胞凋亡和迁移(OstbergJR等，Immunology today.1998；19:546–50)。

糖蛋白，例如糖基化的CD43，在细胞信号传导，免疫识别和细胞-细胞相互作用中起主要作用，因为它们的聚糖分支赋予结构可变性和对凝集素配体的结合特异性(OhtsuboK.等，Cell 2006；126,855–867)。粘蛋白型糖蛋白的特征在于高含量的O-连接的碳水化合物链(O-聚糖)，并且在造血细胞和上皮细胞的膜上分泌或表达。O-聚糖生物合成在高尔基体中起始，N-乙酰基-半乳糖胺(GalNAc)通过UDP-N-乙酰基-D-半乳糖胺：多肽N-乙酰半乳糖胺基转移酶(GalNAc-转移酶)与丝氨酸或苏氨酸残基连接，产生O-聚糖的Tn抗原结构。通过添加其他碳水化合物(例如半乳糖，岩藻糖和唾液酸)由组织特异性糖基转移酶催化O-连接的聚糖分支的后续延伸，这导致O-聚糖结构的复杂阵列的合成，该结构不同于O-连接的碳水化合物链的性质和长度(Wopereis S.等，Clin.Chem 2006；52,574–600)。另外，寡糖可以通过唾液酸化，岩藻糖基化，硫酸化，甲基化或乙酰化来修饰。O-聚糖结构的截短以及特定O-聚糖的异常表达发生在癌细胞中，表明异常糖基化可通过改变细胞信号传导，粘附和抗原性而促进癌症进展(Hakomori S.等，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.2002；99,10231–10233,Brockhausen I.EMBO Rep.7 2006；599–604)。

癌胚抗原(OA)主要是糖蛋白和一种或多种基因的产物，其通常仅在胎儿发育期间高度表达，在分化过程中逐渐被抑制，并因此不在成体组织中表达。它们在成人中的重新表达是癌症中发生的受控基因异常激活的结果。癌胚表位(OE)是抗体识别的OA的一部分。鉴定OA或特定的癌胚表位(OE)，其表达仅限于癌症组织，可能不仅用于检测早期致癌过程，而且最重要的是，在开发新的人类癌症免疫治疗方法中可能是至关重要的。

本发明的目的是提供一种允许检测OE和开发新型免疫治疗方法的抗体。

该问题由根据本发明的抗体解决。实施例中显示的数据表明，由于胎儿组织中限制性表达和恶性肿瘤中再表达的特定模式，由根据本发明保藏的杂交瘤细胞产生的抗体识别的表位可以被认为是OE。因此，后者代表了用于治疗人类癌症的创新性免疫治疗策略的潜在合适靶标。

此外，开发了嵌合抗原受体(CAR)，其包含基于本发明抗体的结合分子的scFv，其与包含CD3ζ链，T细胞受体的信号传导区和两个共刺激结构域CD28和41BB的细胞内区域连接。表达根据本发明的CAR的CD3⁺淋巴细胞诱导针对表达由根据本发明保藏的杂交瘤细胞产生的抗体识别的表位的细胞的显著细胞毒性。