[发明专利]抗人IgM单克隆抗体、其杂交瘤细胞株及应用

说明书

本发明涉及杂交瘤细胞株及其所分泌单克隆抗体，所述抗体能与人IgM特异性结合，并可用于人IgM的体外检测，尤其适合用于副流感病毒感染的早期诊断。本发明还涉及包括所述杂交瘤细胞株或单克隆抗体的试剂盒。

技术领域

本发明涉及一种单克隆抗体，特别涉及一种抗人IgM的单克隆抗体。

背景技术

免疫诊断试剂是体外诊断试剂的主要类型之一。其利用抗原与抗体互相结合的特异性反应来进行定性或定量的诊断，无论是技术还是市场，此类试剂在目前所有诊断试剂产品中发展最快。

病原微生物感染人体后，在刺激诱导体液免疫应答的过程中IgM型抗体最先产生，感染性疾病的早期诊断是进行早期、有效治疗的前提，特别是对于起病急，病情凶险的感染性疾病，早期诊断尤为重要，由于感染后机体最先出现的抗体为IgM型抗体，故检测发病初期患者血液中特异性IgM抗体在临床早期诊断中具有重要的意义。

近年来，存在一些关于抗人IgM单克隆抗体的研究，如专利文献WO 2010026758 A1中公开了一种抗人IgM单克隆抗体，该专利旨在解决多克隆抗体特异性低的问题，并着重考察了单克隆抗体诱导人IgM之间凝集的性质并验证了其抑制非特异反应的效应，但并未关注于该抗人IgM单克隆抗体用于体外诊断试剂时的系统性评价(如、抗体效价、交叉反应性、稳定性、检测灵敏度及特异性等)，因而，该抗体是否适于制备体外诊断试剂是不明确的。

又例如，厦门波生生物抗人IgM单克隆抗体是常见的商品化抗人IgM单克隆抗体，但是其稳定性欠佳，从而在用于免疫诊断抗体时存在不足。

实际上，筛选用于制备体外诊断试剂的单克隆抗体是一个复杂的过程，首先要获得很好的抗原，来制备足够多的抗体，然后对抗体进行系统的评价，获得具有临床相关性的候选抗体，再开发成检测试剂。其中，抗体效价、交叉反应性、稳定性和临床效果等均是重要的评价因素，如抗体效价高低反映了一定浓度下与抗原反应的最低滴度，滴度越低效价越高；抗体交叉反应性可影响该抗体的特异性；抗体的稳定性会直接影响最终结果的可靠性，而稳定性较差的抗体对保存条件、操作条件要求更高，从而降低了其作为诊断试剂的实用性及结果的可靠性，并不可避免地引起成本的上升；临床试验则用来说明抗体在诊断某种特定疾病时的效果。

因此，为了在体外诊断方面的应用，本领域急需系统性评价结果较佳，且尤适用于病原感染的早期诊断的单克隆抗体。

发明内容

本发明的目的是提供一种抗人IgM单克隆抗体、分泌该抗体的杂交瘤细胞株、含上述单克隆抗体或杂交瘤细胞株的试剂盒以及它们在检测人IgM中的用途。通过系统性评价，所述抗体在各方面均有较佳表现，从而适合作为免疫诊断试剂用于制备体外诊断试剂盒，尤其适合制备副流感病毒早期诊断试剂盒。

为此，本发明人进行了大量研究，通过人IgM来免疫小鼠，细胞融合后经有限稀释法克隆至少4次，直到达到单克隆，从得到的众多克隆中筛选到1株能稳定分泌抗体的新型杂交瘤细胞株(Hybridoma)IgM-7，并于2018年3月8日将其保藏于中国典型培养物保藏中心，湖北省武汉市武昌珞珈山武汉大学，保藏编号为CCTCC NO:C201849，从而完成了本发明。

在第一个方面，本发明提供了一种杂交瘤细胞株，其保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:C201849。

在第二个方面，本发明提供了一种单克隆抗体，所述单克隆抗体能够与人IgM特异性结合。

在一个实施方式中，所述单克隆抗体不与人IgG、鼠IgG、兔IgG或牛IgG结合。

在另一个实施方式中，所述单克隆抗体的中值效价为41150且在反复冻融、长期保存、热加速恶劣条件下具有更优的稳定性和可靠性。

在一个优选的实施方式中，所述单克隆抗体是由本发明的杂交瘤细胞株分泌的抗体。