[发明专利]一种干细胞的保存方法

说明书

本发明提供了一种干细胞的保存方法，包括如下步骤：(1)干细胞原代培养：将干细胞转入完全培养基中进行培养，但细胞融合度达到80％以上时，往培养瓶中加入消化酶和生理盐水，让消化酶铺匀细胞面，当细胞变圆后，终止消化；(2)干细胞传代培养：接种原代细胞进行培养，细胞密度达到80％以上，再次传代，传至第3‑5代，收集细胞并计数；(3)保存干细胞：取干细胞与所述保存液混合，置于培养箱中培养。所述保存方法能够长时间常温保存脐带间充质干细胞活力，保存24h后细胞活力仍在80％以上。

技术领域

本发明涉及生物医学领域，具体涉及一种干细胞的保存方法，尤其涉及一种保存液组合物用于脐带间充质干细胞的保存方法。

背景技术

脐带间充质干细胞(MSCs)具有较高的分化潜能，可向多个方向进行分化。它在骨、软骨、肌肉、肌腱、韧带、神经、肝、内皮和心肌等组织工程方面具有广阔的临床应用前景。有报道从人脐带中分离出MSCs，且细胞含量、增殖能力优于骨髓MSCs，免疫原性比骨髓MSCs低，并且具有取材方便，无伦理学争议等优点，因此越来越受到研究工作者们的关注。

MSCs在临床移植治疗中，不能将新鲜分离的干细胞直接输注于人体内，它需要先存放在可以输注的保存液(如0.9％氯化钠注射液)中一定时间，再输注于体内。MSCs在离体情况下活力会渐渐下降，这直接影响了分离的干细胞数量和质量，如何维持离体MSCs的活性成为了当务之急。目前临床常用的保存液有0.9％氯化钠注射液、5％葡萄糖注射液，1％人血白蛋白液等，但MSCs在这些保存液中活性会下降，影响临床的治疗效果。

目前的脐带保存方法存在如下问题：1.保存液的由基础的培养基构成，营养成分复杂，且该成分不一定适合脐带在离体情况下的所需；2.保存过程繁琐，条件苛刻；3.对MSCs的保存效果不佳。目前找到一种能够有效保存MSCs的方法是一种亟待解决的问题。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供了一种干细胞的保存方法，所述干细胞的保存方法能够长时间常温保存脐带间充质干细胞活力，保存24h后细胞活力仍在80％以上。

为达此目的，本发明采用了以下技术方案：

第一方面，本发明提供了一种干细胞的保存方法，包括如下步骤：

(1)干细胞原代培养：将干细胞转入完全培养基中进行培养，但细胞融合度达到80％以上时，往培养瓶中加入消化酶和生理盐水，让消化酶铺匀细胞面，当细胞变圆后，终止消化；

(2)干细胞传代培养：接种原代细胞进行培养，细胞密度达到80％以上，再次传代，传至第3-5代，收集细胞并计数；

(3)保存干细胞：取干细胞与所述保存液混合，置于培养箱中培养。

本发明中，通过采用特定的培养和消化方法，配合特定的保存液，使得干细胞能够在常温下保存，且24h后干细胞活力仍能在80％以上，对干细胞表面标记不产生太大的影响。