[发明专利]一种甘蓝型油菜BnKCS1-2基因及其构建的载体和应用

权利要求书

1.一种甘蓝型油菜BnKCS1-2基因，其特征在于，该基因是甘蓝型油菜超长链脂肪酸形成的关键酶基因：β-酮脂酰-CoA合酶基因，其核苷酸序列如SEQ.ID.NO.1所示。

2.一种甘蓝型油菜BnKCS1-2基因构建的载体，其特征在于，是将SEQ.ID.NO.1所示的BnKCS1-2基因克隆入植物表达载体的多克隆位点。

3.如权利要求2所述的甘蓝型油菜BnKCS1-2基因构建的载体，其特征在于，该载体为pCambia-35S-BnKCS1-2表达载体，通过BamHI和SacI酶切位点将BnKCS1-2基因克隆入植物表达载体pCambia2301M1DPB。

4.一种基于BnKCS1-2基因过表达的转基因甘蓝型油菜的制备方法，其特征在于，包括以下操作：

1)通过BamHI和SacI酶切位点将BnKCS1-2基因克隆入植物表达载体pCambia2301M1DPB，构建pCambia-35S-BnKCS1-2表达载体；

2)将构建好的植物超表达载体pCambia-35S-BnKCS1-2导入农杆菌；

3)然后利用农杆菌介导的下胚轴转化方法导入油菜：

将无菌的油菜苗下胚轴切成小段，均匀的接种于MSp培养基，28℃光照培养2-3天进行预培养；将预培养的下胚轴浸入OD₆₀₀为0.4左右的重悬农杆菌菌液中5-8min，之后除去多余的农杆菌菌液，将下胚轴接种于MSc培养基上，28℃黑暗培养48小时，之后接种于MSi培养基上，28℃下光照培养14天左右，至外植体两端长出明显抗性愈伤为止；

将长有抗性愈伤的外植体接种于MSd培养基上，28℃下光照培养，15天左右更换一次MSd培养基，直至抗性愈伤分化出芽为止；

将分化出芽的外植体转接于MSe培养基上，28℃下光照培养，至长出茎及叶片；

把长出发达的茎和叶的幼苗移至MSr培养基上，28℃下光照培养，至长出发达根部为止；

MSr培养基中茎、叶、根都生长正常的幼苗，敞开培养罐，在培养间生长2-3天，然后移入0.1MS液体培养基，待其长至5-6位叶。

5.权利要求1所述的甘蓝型油菜BnKCS1-2基因在制备表皮蜡含量增加的转基因油菜中的应用。

6.权利要求1所述的甘蓝型油菜BnKCS1-2基因在提高植物抗逆性中的应用。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，是将甘蓝型油菜BnKCS1-2基因转染到油菜中使其过表达，改变油菜叶片蜡质含量的变化，提高油菜的抗旱性、抗病性。

8.权利要求1所述的甘蓝型油菜BnKCS1-2基因在制备用于生物燃料的转基因甘蓝型油菜中的应用。