[发明专利]一种快速响应的一氧化氮的近红外探针及其制备和生物应用

权利要求书

1.一种快速响应的一氧化氮的近红外探针，其特征在于：所述的荧光探针为BT-NH荧光探针，其结构如Ⅰ所示：

2.根据权利要求1所述的快速响应的一氧化氮的近红外探针，其特征在于：引入邻苯二胺作为NO捕获器，引入己基烷基链提高探针的溶解度。

3.根据权利要求1所述的快速响应的一氧化氮的近红外探针的制备方法，其特征在于：所述的探针的制备线路图式如下：

步骤1：三丁基(4-己基硫代菲芬-2-基)锡烷(1)的合成

将3-己基噻吩2.50-10.00g和新鲜蒸馏的干式四氢呋喃50.00-200.00mL置于250ml单颈瓶中，在氮气环境下，于-78℃搅拌30分钟后，逐滴加入三丁基氯化锡8.16-32.64mL inTHF搅拌2小时，然后加入三丁基氯化5.08-20.30.00mL，将混合物置于室温，搅拌12小时，反应结束后，在混合液中加50.00-200.00mL并用己烷萃取，有机层用无水硫酸钠干燥，并用真空去除溶剂，得到棕色液体化合物1；

步骤2：苯并[c][1，2，5]噻二唑(2)的合成

向1000毫升的双颈瓶中加入邻苯二胺2.50-10.00g，并溶解于二氯甲烷100.00-400.00mL和三乙胺9.35-37.40g的混合溶液中，然后通过滴液漏斗缓慢滴加亚硫酰氯1.85-7.40mL，直至固体完全溶解后，回流20小时，混合物在低压下去除溶剂，再加入聚乙烯150.00-600.00mL溶解，将混合液过滤后收集滤液，在真空中除去溶剂，得到棕色固体化合物2；

步骤3：4，7-二溴苯并[c][1，2，5]噻二唑(3)的合成

在500ml双颈烧瓶中加入化合物2 2.50-10.00g并溶解在溴化氢47％，40.00-160.00mL中，将含有液溴8.80-35.20g的溴化氢47％，25.00-100.00mL缓慢加入双颈烧瓶中，待完全加入后，将混合物回流6小时，直至形成橙色固体沉淀。待混合物冷却至室温后，过滤混合物并用水洗涤获得浅黄色固体，用氯仿将固体重结晶，得到白色固体化合物3；

步骤4：4-7-二溴-5-6-二硝基苯并[c][1，2，5]-噻二唑(4)的合成

在0℃下，将硝酸1.25-5.00g逐滴加入含有三氟甲磺酸15.30-61.20g的双颈烧瓶中，搅拌约30分钟后，将化合物3 2.50-10.00g在10分钟内加入到混合酸中，在50℃下搅拌过夜后，用薄层色谱法TLC分析混合液只显示一个斑点时，将混合物倒入冰水中，过滤得到沉淀物后，用水洗涤，并用乙醇重结晶纯化产物。得到黄色固体化合物4；

步骤5：4，7-双(4-己基噻吩-2-基)-5，6-二硝基苯并[c][1，2，5]噻二唑(5)的合成

先将化合物4 1.00-4.00g溶解在四氢呋喃10.00-40.00mL和二甲基甲脒5.00-20.00mL的混合液中，然后在氮气环境下，将化合物1 3.55-14.20g和双三苯基磷二氯化钯0.02-0.10g加入到溶液中，混合物在100℃下反应过夜，待混合物冷却至室温后，加入氟化钾10.00-40.00mL，用Celite过滤后，收集滤液并浓缩，产物经柱层析法二氯甲烷:聚乙烯＝1:10纯化，得到橙色固体化合物5；

步骤6：4，7-双(4-己基噻吩-2-基)苯并[c][1，2，5]噻二唑-5，6-二胺(BT-NH)的合成

在氮气条件下，将化合物5 0.50-2.00g溶解在醋酸7.50-30.00mL里，然后加入铁0.50-2.00g，将混合物加热到80℃反应6小时，待混合物冷却至室温后，用乙酸乙酯提取产物，并用氢氧化钠水溶液洗涤，在低压下除去溶剂，用柱层析乙酸乙酯：聚乙烯＝1：10纯化产物，得到黄色固体BT-NH。