[发明专利]检测硫化氢的试剂及其合成方法和应用

说明书

本发明提供了一种检测硫化氢的试剂及其合成方法和应用。试剂的中文名称为3'‑(4‑(2‑(7‑叠氮基‑2‑氧代‑2H‑色烯‑4‑基)乙酰基)哌嗪‑1‑基氧)‑6'‑羟基‑3H‑螺[异苯并呋喃‑1,9'呫吨]‑3‑酮，结构式为本发明提供了一种对硫化氢特异性检测的方法，在MeCN:PBS(9:1,v/v,PBSbuffer,pH7.4)的溶液中，通过荧光分光光度计定量检测硫化氢的含量。该检测过程简便、灵敏、快速，检测结果准确。

技术领域

本发明涉及检测硫化氢的试剂及其合成方法和应用。

背景技术

内源性的硫化氢主要来自于L-硫化氢的酶解作用，其生成机制至少与4种不同的酶有关:胱硫醚-β-合成酶(CBS)、胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)、3-巯基丙酮酸硫转移酶(3-MST)和硫化氢酶(CL)。这些酶广泛的存在于人体各种组织和器官中。在生理浓度水平下，硫化氢参与一系列的生理调控过程，例如调节血管张力、心肌收缩、神经传导和胰岛素分泌等。细胞一旦不能维持其正常的硫化氢浓度，便会引起动脉和肺动脉高压、阿尔茨海默氏症、胃粘膜损伤和肝硬化等疾病。此外，硫化氢也可清除活性氧和活性氮物种。许多研究还表明三个气体递质硫化氢、一氧化氮和一氧化碳之间还通过各种交互作用调控人体的健康与疾病。

应生物体系中硫化氢浓度水平检测的要求，设计选择性好、灵敏度高、具有低细胞毒性的用于检测活细胞和组织内硫化氢水平变化的荧光探针，已成为生物医学发展中具有挑战性的前沿课题之一。

发明内容

本发明的目的是提供一种操作方便、选择性好、灵敏度高的检测硫化氢的荧光素衍生物及其制备方法。在本发明中，合成了一种基于荧光素的化合物，通过硫化氢和化合物在反应前后的荧光变化，实现硫化氢的特异性检测。

本发明提供了一种荧光素衍生物Flu-N₃，结构式为：

本发明还提供了上述荧光素衍生物Flu-N₃的合成方法，包括以下步骤：1)将荧光素溶于氢氧化钠溶液中并在油浴中加热，冷却至室温，将混合物倒入冰水中，用浓盐酸酸化，并在室温下放置，过滤沉淀物并干燥，得到2-(2,4-二羟基苯甲酰基)苯甲酸；2)将步骤1)所得2-(2,4-二羟基苯甲酰基)苯甲酸在三氟乙酸中的溶液中加入1-(3-羟基苯基)-哌嗪，然后加热回流并搅拌，通过旋转蒸发器除去溶剂，并将剩余物溶于蒸馏水中，得到粗产物，粗产物用乙酸乙酯萃取，并用无水硫酸钠干燥，然后通过柱色谱进一步纯化，得到荧光素衍生物Flu-N₃。

在上述荧光素衍生物Flu-N₃的合成方法中，其中，所述步骤2)中2-(2,4-二羟基苯甲酰基)苯甲酸和1-(3-羟基苯基)-哌嗪的摩尔比为1.2：1，柱色谱的洗脱剂为二氯甲烷和甲醇。

本发明还提供了上述荧光素衍生物Flu-N₃在硫化氢检测中的应用。