[发明专利]一种含苯丙氨酸的黄嘌呤氧化酶抑制剂及其用途

说明书

本发明公开了一种含苯丙氨酸的黄嘌呤氧化酶抑制剂及其在制备预防和治疗高尿酸血症和痛风疾病药物中的应用，该抑制剂含有多肽FH、FK、FVR或LFW中的一种以上；这四种多肽可以从鲣鱼蛋白酶解液中分离获得，鲣鱼酶解物加入乙醇，离心取上清液浓缩喷雾干燥后获得鲣鱼酶解物醇溶组分；醇溶组分经过Sephadex G‑15分离，最后再经UPLC分离，得到所述的四种多肽。本发明的四种多肽，可以化学合成，也可以从鲣鱼酶解产物中定向制备，具有很好的黄嘌呤氧化酶抑制活性，因此可直接或作为先导化合物进行修饰改性处理应用于预防和治疗高尿酸血症和痛风疾病的保健食品或药物中。

技术领域

本发明属于功能性多肽领域，具体涉及一种含苯丙氨酸的黄嘌呤氧化酶抑制剂及其在预防和治疗高尿酸血症和痛风疾病药物中的应用。

背景技术

高尿酸血症是一种由于人体尿酸生成和/或排泄异常导致的综合病症，也是痛风、慢性肾病、心力衰竭、中风、动脉粥样硬化等多种慢性疾病的诱因。主要表征为血浆中尿酸含量超过正常范围(男性超过7.0mg/mL，女性超过6.0mg/mL)。

在人体内，黄嘌呤氧化酶催化次黄嘌呤氧化为黄嘌呤，并进一步催化黄嘌呤转变为尿酸，因而它是人体内尿酸生成所必须的氧化酶。研究发现，黄嘌呤氧化酶抑制剂(别嘌呤醇，非布索坦，多酚等)均能够有效地降低高尿酸血症患者血浆中的尿酸水平。但目前市售降尿酸药物不同程度具有肝肾损伤等严重副作用。

发明内容

本发明的首要目的是提供一种黄嘌呤氧化酶抑制剂，该抑制剂具有较强的黄嘌呤氧化酶抑制活性，具有潜在降尿酸功效。

本发明的另一目的是提供上述的黄嘌呤氧化酶抑制剂在预防和治疗高尿酸血症和痛风疾病药物中的应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种黄嘌呤氧化酶抑制剂，含有多肽FH、FK、FVR或LFW中的一种以上；

其中，F为苯丙氨酸；H为组氨酸；K为赖氨酸；V为缬氨酸；R为精氨酸；L为亮氨酸；W为色氨酸。

所述的四种多肽可以从鲣鱼蛋白酶解液中分离获得，具体步骤如下：

(1)鲣鱼肉蛋白酶水解：将鲣鱼肉搅碎后，按质量比1:1加水搅拌，升温至50～60℃，加入鲣鱼肉质量1.0～2.0％的蛋白酶，酶解4～5h后升温至95℃灭酶15min，酶解液经过滤浓缩和喷雾干燥获得鲣鱼酶解物；

(2)乙醇分离：将鲣鱼酶解物按照质量比1:4～1:6加入60～80％(V/V)的乙醇，20～40℃条件下搅拌1～2小时，在4800×g条件下离心15min后，取上清液浓缩喷雾干燥后获得鲣鱼酶解物醇溶组分；

(3)凝胶柱纯化：将鲣鱼酶解物醇溶组分加水复溶至20～30％(W/V)浓度后，经过Sephadex G-15分离，上样量2～4mL，以水为流动相，流量为2～5mL/min，将具有最高黄嘌呤氧化酶抑制活性的组分收集后浓缩冻干得到凝胶柱纯化多肽；

(4)UPLC(超高液相色谱)分离：将凝胶柱纯化多肽粉末，用HSS T3(2.1×100mm,1.8μm,Waters,USA)色谱柱进行分离，流动相由含0.1％甲酸的超纯水(A)和乙腈(B)组成，洗脱方法为梯度洗脱即：0-2min，100％A；2-5min，等度洗脱至50％；5-7min，等度洗脱至30％；7-8min，等度洗脱至100％A；分别收集1.7-1.8min、1.9-2.0min、4.7-4.8min、5.8-5.9min组分洗脱液，分别是多肽FH、FK、FVR、LFW所在组分；

步骤(1)所述的蛋白酶优选中性蛋白酶、胰蛋白酶或Alcalase 2.4L蛋白酶。