[发明专利]一种基于石墨烯-金-钯纳米复合材料的胰腺癌肿瘤标志物免疫传感器的制备

权利要求书

1.一种用于检测肿瘤标志物CA242的基于rGO-Au-Pd纳米复合材料修饰的新型无标记电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下制备步骤：

(1)rGO-Au-Pd复合材料溶液的制备

将PVP和GO溶解在双蒸水中搅拌；将PdCl₂、HAuCl₄和HCOOH加入到上述溶液中，90～100℃下剧烈搅拌直至颜色从褐色变为黑色，离心，使用乙醇和双蒸水的混合物洗涤，干燥，即得rGO-Au-Pd复合物，将其悬浮于缓冲液中制得rGO-Au-Pd溶液；

所述PVP和GO的质量比(mg/mg)为(70～90)：(10～30)，PVP和GO在双蒸水中搅拌时间为10～14h；

所述PdCl₂、HAuCl₄和HCOOH体积比(μL/μL/μL)为(248～252)：(280～284)：(348～352)，其中PdCl₂的浓度为56.4～57mM，HAuCl₄的浓度为50～51mM，Au与Pd的摩尔比为1:1；

(2)玻碳电极(GCE)的修饰

2.1GCE的清理：氧化铝粉末仔细研磨GCE表面，再用双蒸水和乙醇超声清洗，干燥；

2.2rGO-Au-Pd-抗-CA242/GCE的制备：

将GCE置于步骤(1)所得的rGO-Au-Pd悬浮液中，干燥，使用循环伏安法在N₂饱和PBS中从-1.5V扫描至0V，使得rGO-Au-Pd被电化学完全还原；在所得电极表面滴涂8～12μLCA242抗体溶液孵育，得到rGO-Au-Pd-抗-CA242/GCE；然后在所得的rGO-Au-Pd-抗-CA242/GCE表面滴涂0.1％BSA溶液，保存，即得用于检测肿瘤标志物CA242的基于rGO-Au-Pd纳米复合材料修饰的新型无标记电化学免疫传感器；

所述rGO-Au-Pd溶液的浓度为2mg/mL；所述循环伏安法扫描10个循环。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述GO的浓度为0.5mg/mL。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，反应为95±2℃；所述离心为10,000rpm；所述洗涤次数为3～4次。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述缓冲液为1.5～2.5mg/mL的PBS。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤2.1中，所述氧化铝粉末为0.3和0.05μm；清洗时间为15～25min；所述干燥为在氮气中干燥；所述玻碳电极(GCE)为工作电极，直径为3mm。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤2.2中，所述rGO-Au-Pd悬浮液的体积为6～10μL。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤2.2中，所述CA242抗体溶液浓度为60～70μg/mL。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，步骤2.2中，所述CA242抗体溶液浓度为60μg/mL；所述孵育为4℃孵育过夜。

9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，步骤2.2中，所述保存为4℃条件下的pH＝7.0的PBS中保存。

10.权利要求1～9任一所述制备方法得到的用于检测肿瘤标志物CA242的基于rGO-Au-Pd纳米复合材料修饰的新型无标记电化学免疫传感器。

11.权利要求10所述的新型无标记电化学免疫传感器的非疾病诊断应用，其特征在于，所述应用为用于肿瘤标志物CA242的快速、灵敏检测。