[发明专利]一种pH荧光染料、pH荧光探针、制备方法和应用

权利要求书

1.一种pH荧光染料，其特征在于，包括pH敏感性蛋白溶液和参比pH敏感的荧光染料溶液；

所述pH敏感性蛋白溶液和参比pH敏感的荧光染料溶液的体积比为40～60：1；

所述pH敏感性蛋白包括牛血清蛋白、人血清蛋白、酪蛋白和乳球蛋白中的至少一种；

采用低碳醇变性、丙酮变性、加热变性、加入重金属盐变性、加入SDS变性或加入尿素变性的方式对蛋白质进行变性，得到pH敏感性蛋白；

所述低碳醇包括甲醇、乙醇、丙醇、丁醇和乙二醇中的至少一种；

所述参比pH敏感的荧光染料包括尼罗红、荧光素、菁染料和苯并氧杂蔥类化合物及其衍生物中的至少一种。

2.权利要求1所述的pH荧光染料的制备方法，其特征在于，将pH敏感性蛋白溶液和参比pH敏感的荧光染料溶液混合均匀，得到所述pH荧光染料。

3.根据权利要求2所述的pH荧光染料的制备方法，其特征在于，采用乙醇变性的方式对蛋白质进行变性，包括：

将蛋白质溶于水中，除去气泡；然后在搅拌下向其中逐滴加入质量分数为70～80％的乙醇，得到溶液A；

向溶液A中滴加质量分数为6～10％的交联剂，避光，搅拌交联15～20h；然后离心，分离，得到蛋白溶液；

每400～600mg蛋白质溶于8～12mL水中，乙醇的加入量为12～30mL，交联剂的加入量为150～300μL；

所述交联剂包括戊二醛、乙二醛和乙醇醛中的至少一种。

4.根据权利要求1所述的pH荧光染料的制备方法，其特征在于，

所述荧光素包括异硫氰酸荧光素、羧基荧光素及其衍生物中的一种或多种；和/或，所述菁染料包括菁染料Cy3、菁染料Cy5和菁染料Cy7中的一种或多种；和/或，所述苯并氧杂蔥类化合物及其衍生物包括1，2－二氨基蒽醌、硝基苯并氧杂恶二唑和二苯基蒽系列中的一种或多种；

所述参比pH敏感的荧光染料的浓度为0.05～0.2mg/mL。

5.权利要求1所述的pH荧光染料在荧光探针中的应用；

所述荧光探针为pH荧光探针。

6.一种pH荧光探针，其特征在于，包括载体以及包裹于所述载体中的权利要求1所述的pH荧光染料；所述pH荧光探针为微米级的pH荧光探针。

7.根据权利要求6所述的pH荧光探针，其特征在于，所述载体包括聚氨酯、环氧树脂、聚苯乙烯和聚酰胺中的至少一种；

所述微米级的pH荧光探针的粒径为1～500μm；

所述载体的粒径为1～500μm；

所述载体和所述pH荧光染料的质量比为500：1～100：1。

8.权利要求6或7所述的pH荧光探针的制备方法，其特征在于，将载体溶液与pH荧光染料混合均匀，得到混合溶液；

将所述混合溶液滴加到含有表面活性剂的水中，混合均匀，得到所述pH荧光探针；

所述载体溶液的浓度为0.08～0.2g/mL；和/或，所述载体溶液与所述pH荧光染料的体积比为1：8～15；

载体的制备方法包括自乳化－固化法、静电喷雾法、微流控法和离子凝聚法中的任意一种；

载体为聚氨酯微球，采用自乳化－固化法制备聚氨酯微球包括：将聚氨酯溶液作为油相滴加到水相中，混合，溶剂挥发使得聚氨酯自固化成球，其中，聚氨酯溶液的浓度为5％～10％，搅拌的速度优选为200～800rpm；

所述表面活性剂包括吐温20和/或吐温80。

9.权利要求1所述的pH荧光染料和权利要求6或7所述的pH荧光探针在生物成像检测、pH值检测或细胞微环境检测中的应用。