[发明专利]酸性当归多糖ASP3、酸性当归多糖-阿霉素共聚物纳米粒以及两者的制备方法和应用

权利要求书

1.一种酸性当归多糖-阿霉素共聚物纳米粒，其特征在于，其是将酸性当归多糖ASP3和阿霉素通过酸敏感的腙键连接起来制备得到，其中所述酸性当归多糖ASP3的提取方法包括：

分离：将当归多糖经过DEAE-cellulose柱层析进行分离，依次用蒸馏水、浓度为0.05-0.15mol/L和0.25-0.35mol/L的氯化钠溶液进行梯度洗脱，收集第一洗脱液，用苯酚-硫酸法检测所述第一洗脱液在检测波长为490nm的吸光度值，根据洗脱曲线合并相同流分，浓缩、透析、冻干，即得中性多糖ASP0、酸性多糖ASP1和酸性多糖ASP3；以及

纯化：取经分离获得的所述酸性多糖ASP3，溶于蒸馏水中，用滤膜过滤后，所得滤液经Sephadex柱层析进行提纯分离，用蒸馏水洗脱，收集第二洗脱液，即得所述酸性当归多糖ASP3，并且

其中所述酸性当归多糖ASP3具有的重均分子量为90-100kDa。

2.根据权利要求1所述的酸性当归多糖-阿霉素共聚物纳米粒，其特征在于，所述酸性当归多糖ASP3的提取方法还包括在收集所述第二洗脱液后进行二次纯化：用苯酚-硫酸法检测第二洗脱液在检测波长为490nm的吸光度值，根据洗脱曲线合并相同流分，浓缩、透析、冻干，即得所述酸性当归多糖ASP3。

3.根据权利要求1所述的酸性当归多糖-阿霉素共聚物纳米粒，其特征在于，所述酸性当归多糖ASP3的提取方法还包括在所述分离步骤之前进行：

总多糖提取：将当归粗粉用第一无水乙醇煮提2-4次，每次0.5-4h；随后再用蒸馏水煮提2-4次，每次0.5-4h，合并水提取液，浓缩后加第二无水乙醇沉淀得到粗当归多糖；以及

脱蛋白：将粗当归多糖用蒸馏水溶解后，再脱蛋白得到当归多糖。

4.根据权利要求3所述的酸性当归多糖-阿霉素共聚物纳米粒，其特征在于，在所述总多糖提取步骤中，所述当归粗粉和所述第一无水乙醇的质量比为1:9-11。

5.根据权利要求4所述的酸性当归多糖-阿霉素共聚物纳米粒，其特征在于，在向浓缩后的所述水提取液中加入所述第二无水乙醇之前，还包括将浓缩后的所述水提取液离心并弃去沉淀，接着在上清液中加入所述第二无水乙醇。

6.根据权利要求5所述的酸性当归多糖-阿霉素共聚物纳米粒，其特征在于，所述上清液与所述第二无水乙醇的质量比为1:3-5。

7.根据权利要求3所述的酸性当归多糖-阿霉素共聚物纳米粒，其特征在于，在所述脱蛋白步骤中，将所述粗当归多糖配制成浓度为2-10mg/mL的粗当归多糖水溶液，加入正丁醇-氯仿混合液，振荡15-25min，离心，收集上层溶液，反复操作脱蛋白步骤6-10次，合并上层溶液，减压浓缩后经透析、冷冻干燥得当归多糖。

8.根据权利要求7所述的酸性当归多糖-阿霉素共聚物纳米粒，其特征在于，所述粗当归多糖水溶液与所述正丁醇-氯仿混合液的体积比为3-5:1。

9.根据权利要求8所述的酸性当归多糖-阿霉素共聚物纳米粒，其特征在于，所述正丁醇-氯仿混合液中的正丁醇-氯仿的体积比1:3-5。

10.根据权利要求1所述的酸性当归多糖-阿霉素共聚物纳米粒，其特征在于，所述酸性当归多糖ASP3为果胶多糖，所述酸性当归多糖ASP3的主链为→4)-α-D-GalpA-(1→2)-α-L-Rhap-(1→，侧链为连接至Rha上的α-T-Araf/α-1,5-Araf和β-1,4Galp。

11.根据权利要求1-10中任一项所述的酸性当归多糖-阿霉素共聚物纳米粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

将所述酸性当归多糖ASP3与水合肼反应，制备ASP3-酰肼化物；

将所述ASP3-酰肼化物与脱盐酸后的盐酸阿霉素反应，制备酸性当归多糖-阿霉素；

将所述酸性当归多糖-阿霉素透析、过微孔滤膜，得到酸性当归多糖-阿霉素共聚物纳米粒。