[发明专利]基于环介导恒温扩增的丙型肝炎病毒基因分型方法

权利要求书

1.一种丙型肝炎病毒基因分型方法，其特征在于：基于LAMP方法，针对丙型肝炎病毒5’UTR-Core区中各亚型特异的基因序列，设计不同亚型的LAMP引物，包括两条外引物、两条内引物和环引物，在65℃，60min条件下采用NEB试剂进行检测；

所述反应体系为：12.5μL2×MasterMix、2.5μL引物混合液、1μLcDNA模板和9μLRnasefree水在基因扩增仪下反应；

所述引物混合液两条外引物各5pmol、两条内引物各40pmol和环引物20pmol；

所述反应体系从红色变为黄色时结果判断为阳性。

2.如权利要求1所述的一种丙型肝炎病毒基因分型方法，其特征在于：所述丙型肝炎病毒1b，2a，3和6a基因分型方法，包括以下步骤：

1)基于LAMP方法，设计丙型肝炎病毒1b，2a，3和6a对应的两条外引物、两条内引物和环引物

HCV1b

外引物1b-F3：caaacgtaacaccaaccgc、1b-B3：ggcgagccttggggata

内引物1b-FIP：cggcaacaggtaaactccaccacgcccacaggacgtcaag

1b-BIP：taagtgtgcgcgcgactatgtcgccttccacgagg

环引物1b-LF：ggaagacttccgagcggt

HCV2a

外引物2a-F3：tgcggaaccggtgagt、2a-B3：cacggtctacgagacctcc

内引物2a-FIP：ggccgggcatagagtgggtcaccggaattgccgggaag

2a-BIP：ccgcaagactgctagccgagcrccctatcaggcagtacca

环引物2a-LB：tagcgttgggttgcgaaag

HCV3

外引物3-F3：ctcccgggagagccatag、3-B3cacggtctacgagacctcc

内引物

3-FIP：agcgggttgttccaagaaaggagtctgcggaaccggtgag

3-BIP：ccgcgagatcactagccgagtccctatcaggcagtaccaca

环引物3-LF：ccggcgattccggtgta

HCV6a

外引物6a-F3：gcaagactgctagccgag、6a-B3ctccgccaacgatctgac

内引物6a-FIP：tacgagacctcccggggcactagcgttgggttgcgaaag

6a-BIP：tgagcacwcttccaaaaccccacgccacccgggaactt

环引物6a-LB：tcaggcagtaccacaaggc

2)在65℃，60min条件下采用NEB试剂进行检测，在反应体系为：12.5μL2×MasterMix、2.5μL引物混合液、1μLcDNA模板和9μLRnasefree水在基因扩增仪下反应；

所述引物混合液两条外引物各5pmol、两条内引物各40pmol和环引物20pmol；

所述反应体系从红色变为黄色时结果判断为阳性。

3.如权利要求1或2任意一项所述的丙型肝炎病毒基因分型方法，其特征在于：所述丙型肝炎病毒基因分型方法最低检测限可以达到10³IU/mL。

4.一种丙型肝炎病毒基因分型方法在丙型肝炎病毒基因分型试剂盒试剂盒中的应用。