[发明专利]塞内卡病毒和口蹄疫病毒双重实时荧光定量PCR检测试剂盒在审
| 申请号： | 201810933044.8 | 申请日： | 2018-08-16 |
| 公开（公告）号： | CN109097495A | 公开（公告）日： | 2018-12-28 |
| 发明（设计）人： | 王秀明;陈君彦;武瑾贤;魏学峰;刘国英;关平原;范秀丽;张贵刚;王艳杰;刘建奇 | 申请（专利权）人： | 金宇保灵生物药品有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京尚诚知识产权代理有限公司 11322 | 代理人： | 谢弘;鲁兵 |
| 地址： | 010030 内蒙古*** | 国省代码： | 内蒙古;15 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 口蹄疫病毒 内卡 病毒 实时荧光定量PCR 检测试剂 疫苗生产 试剂盒 探针 应用前景广阔 保守基因 两对引物 特异性强 质量监控 专用引物 准确定量 检测 合理化 配苗 引物 鉴别 | ||
1.用于对塞内卡病毒和口蹄疫病毒进行双重实时荧光定量PCR检测的引物和Taqman探针，其特征在于，包括：
用于检测塞内卡病毒的上游引物(SVA-F)和下游引物(SVA-R)，上游引物(SVA-F)的核苷酸序列如序列表中SED ID NO：1所示，下游引物(SVA-R)的核苷酸序列如序列表中SEQ IDNO：2所示；
用于对塞内卡病毒进行实时荧光定量PCR检测的TaqMan探针(SVA-P)，TaqMan探针(SVA-P)的核苷酸序列如序列表中SED ID NO：3所示；
用于检测口蹄疫病毒的上游引物(FMDV-F)和下游引物(FMDV-R)，上游引物(FMDV-F)的核苷酸序列如序列表中SED ID NO：5所示，下游引物(FMDV-R)的核苷酸序列如序列表中SEQID NO：6所示；和
用于对口蹄疫病毒进行实时荧光定量PCR检测的TaqMan探针(FMDV-P)，TaqMan探针(FMDV-P)的核苷酸序列如序列表中SED ID NO：7所示；
所述探针为经过荧光标记的，其5′端标记有报告荧光基团，3′端标记有淬灭荧光基团；且对两种病毒检测探针所标记的报告荧光基团不相同。
2.根据权利要求1所述的引物和TaqMan探针，其特征在于：
所述用于对塞内卡病毒进行实时荧光定量PCR检测的TaqMan探针(SVA-P)的5′端报告荧光基团为FAM，3′端荧光淬灭基团为TAMRA；
用于对口蹄疫病毒进行实时荧光定量PCR检测的TaqMan探针(FMDV-P)的5′端报告荧光基团为ROX，3′端荧光淬灭基团为BHQ2；
所述探针的3′端经磷酸化处理。
3.用于对塞内卡病毒和口蹄疫病毒进行双重实时荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于：
包括权利要求1或2所述的引物和TaqMan探针。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：
使用所述试剂盒时的双重实时荧光定量PCR检测体系为：实时荧光定量一步法PCR反应液2×One Step RT-PCR Buffer III 12.5μL，TaKaRa Ex Taq HS 0.5μL，PrimeScript RTEnzyme Mix II 0.5μL，SVA-F(10μM)1.0μL，SVA-R(10μM)1.0μL，SVA-P(10μM)1μL，FMDV-F(10μM)1.0μL，FMDV-R(10μM)1.0μL，FMDV-P(10μM)1.5μL，RNA-free H2O 3.0μL，模板RNA2.0μL。
5.权利要求1或2所述的引物和TaqMan探针在制备塞内卡病毒和口蹄疫病毒的检测试剂中的应用。
6.权利要求3或4所述的试剂盒在对塞内卡病毒和口蹄疫病毒进行非疾病诊断目的的检测中的应用。
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