[发明专利]一种岩溶碳汇资源化利用的方法

权利要求书

1.一种岩溶碳汇资源化利用的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1：岩溶区微藻的筛选

收集岩溶水体中的微藻，再取该微藻所处的原岩溶水，用于浸泡该微藻，于4℃保存，得到藻原液；

采用浓度梯度稀释法，对藻原液进行分离纯化，得到多个纯藻种，并分别确定其种属；

步骤2：微藻产油性能评估

将步骤1得到的多个纯藻种，分别置于其相对应的培养液中，进行光照恒温扩大培养，离心收集藻细胞，再真空冷冻干燥，分别获得多个纯藻种的冻干藻粉；

利用超声波辅助乙酸乙酯-正己烷法，提取上述多个纯藻种冻干藻粉中的油脂，并分别计算上述多个纯藻种的产油率，筛选出产油率最高的藻种，命名为藻种K；

步骤3：岩溶碳汇的转化

取岩溶水，抽滤，往抽滤后的岩溶水中加入营养盐，配制得到藻种K的培养液；

取处于对数生长期的步骤2得到的藻种K，按体积比10％-15％接种于藻种K的培养液中，进行光照恒温扩大培养，离心收集藻细胞，再真空冷冻干燥，获得该藻种K的冻干藻粉；

步骤4：油脂的收集

利用超声波辅助乙酸乙酯-正己烷法，提取步骤3得到的藻种K的冻干藻粉中的油脂，并用于制备生物柴油。

2.根据权利要求1所述的一种岩溶碳汇资源化利用的方法，其特征在于，步骤1中，所述收集岩溶水体中微藻的具体方法是：在岩溶水体中，用浮游生物网划“∞”字，或者用软毛刷从沉水植物叶面、挺水植物茎表或者石块上刮取微藻，再用浮游生物网过滤后，转移至聚乙烯瓶中。

3.根据权利要求2所述的一种岩溶碳汇资源化利用的方法，其特征在于，所述浮游生物网的孔径为25号。

4.根据权利要求1所述的一种岩溶碳汇资源化利用的方法，其特征在于，步骤2中，所述相对应的培养液，按照“中国科学院淡水藻种库”，网址为http://algae.ihb.ac.cn/Default.aspx进行。

5.根据权利要求1所述的一种岩溶碳汇资源化利用的方法，其特征在于，步骤2中，所述产油率的计算方法为：产油率＝M/N×100％，式中，N为冻干藻粉的质量(g)；M为油脂的质量(g)。

6.根据权利要求1所述的一种岩溶碳汇资源化利用的方法，其特征在于，步骤2和步骤3中，所述离心的速度为10000-12000r/min，离心的时间为10min；所述真空冷冻干燥的温度为-55℃，真空度为5Pa，时间为12h。

7.根据权利要求1所述的一种岩溶碳汇资源化利用的方法，其特征在于，步骤3中，所述岩溶水中无机碳的含量为3-5mmol/L；所述抽滤的具体参数为：滤膜的孔径为0.22μm，压强为0.098MPa，抽气量10L/min；所述微藻种K的培养液为1L体积中含有1.5g的NaNO₃、0.04g的KH₂PO₄、0.075g的MgSO₄·7H₂O、0.036g的CaCl₂·2H₂O、0.006g的柠檬酸、0.006g的柠檬酸铁铵、0.001g的EDTANa₂、0.02g的Na₂CO₃、1mL的A5微量元素液，余量为岩溶水。

8.根据权利要求7所述的一种岩溶碳汇资源化利用的方法，其特征在于，所述A5微量元素液的组成为2.86g/L的H₃BO₃，1.86g/L的MnCl₂·4H₂O，0.22g/L的ZnSO₄·7H₂O，0.39g/L的Na₂MoO₄·2H₂O，0.08g/L的CuSO₄·5H₂O和0.05g/L的Co(NO₃)₂·6H₂O。