[发明专利]一种新型大鼠高血压模型的建立方法及其应用

说明书

本发明公开了一种新型大鼠高血压模型的建立方法及其应用。本发明公开的新型大鼠高血压模型的建立方法，该方法包括步骤有：(a)提供人内含子源性27nt‑miRNA序列，构建其高表达质粒；(b)将(a)步骤中的高表达质粒与X‑treme GENE HP DNA转染试剂按一定比例混合，经生理盐水稀释后，通过大鼠尾静脉瞬时高速注射进入SD大鼠体内，致使大鼠血压升高，并维持高压状态，从而形成一种新型的大鼠高血压模型。本发明的大鼠高血压模型是一种有效的动物疾病模型，可用于验证人内含子源性27nt‑miRNA对正常大鼠血压、血管舒张因子的影响，可用于降压药物的筛选，应用前景较广。

技术领域

本发明涉及基因重组以及动物瞬时注射技术领域，具体涉及一种新型大鼠高血压模型的建立方法及应用。

背景技术

心血管疾病是当今全球发病率与死亡率最高的疾病之一，高血压病则是最常见的心血管疾病，同时被称为严重危害人类健康的“第一杀手”。世界卫生组织(WHO)对高血压定义为：在未使用抗高血压药物的情况下，收缩压≥140mmHg和/或舒张压≥90mmHg。高血压又被分为1、2、3级：1)1级高血压，又称轻度高血压，收缩压140～159mmHg或舒张压90～99mmHg；2)2级高血压，又称中度高血压，收缩压160～179mmHg或舒张压100～109mmHg；3)3级高血压，又称重度高血压，收缩压≥180mmHg或舒张压≥110mmHg。此外，根据高血压患者是否同时具有危险因素，还可以分为低危、中危、高危和极高危组。据统计高血压患者全球达10亿，中国达2亿，美国在5千万以上；值得关注的是,美国心脏协会在2017年底修改高血压标准为收缩压≥130mmHg和/或舒张压≥80mmHg,显示高血压的防治越来越引起高度重视；按照修改后的高血压标准，全球高血压患者的数目至少将翻一倍以上。

高血压病初期，大部分的患者是无症状的，或偶尔出现头晕、头痛等不典型症状，患者没有感觉或感觉不深，但是没有感觉并不代表没有损害。一些身体的症状不易被发现，如全身细小动脉痉挛，随着病情的发展，细小动脉却在渐渐发生硬化。这种变化，多发于冠状动脉，脑动脉、肾动脉，所以说高血压没有症状，不代表没危害，它会慢慢破坏患者的心、脑、肾器官。如果长期不治疗，高血压的危害会最大化，持续的高血压会引起严重的心、脑、肾等器官损伤或疾病，从而导致各种并发症，严重影响健康甚至生命。

miRNAs与高血压的关系。有关研究表明，miRNA参与高血压发生发展的多个环节，主要有以下几个方面：1)miRNAs影响血管内皮细胞功能。持续的血管腔内高压导致内皮细胞功能障碍，失去功能性微血管、血管生成缺陷加重高血压与相关器官损害。miR-125a/b-5p抑制血管内皮细胞内皮素-1的表达，而miR-155又能引起内皮eNOS转录下调、NO等血管活性因子释放降低，从而影响血压调节。2)miRNAs参与肾素-血管紧张素-醛固酮系统功能调节。血管紧张素Ⅱ是RAAS系统的主要生物效应分子，既能使小动脉血管收缩，又能激活交感神经系统，促进醛固酮产生。miR-181a抑制肾交感神经活性和降低肾素的分泌；血管紧张素转换酶(ACE)是miR-143/145的靶基因，miRNA143/145增加导致ACE基因表达减少；miR-421抑制ACE2蛋白转录表达；miR-124和miR-135a可以通过降低盐皮质激素受体蛋白，抑制肾盐潴留；miRNA对RAAS系统产生的这些抑制效应将会降低血压。3)miRNAs参与血管平滑肌细胞增殖和分化调节。高血压病理过程中，血管平滑肌细胞的增殖和分化异常、纤维组织增生肥厚是导致血管病理性重构和管腔狭窄的主要因素。miRNA-143和miRNA-145通过抑制平滑肌细胞增殖，促进细胞的分化，miR-204、miR-124参与调控血管平滑肌细胞及成纤维细胞调节血管内膜重构，而miR-9靶向调控肥厚性通路的活化T细胞核因子C3(NFATc3)和心肌素，逆转肥厚性转变。