[发明专利]一种提取质粒DNA的菌体裂解液、试剂盒及提取质粒DNA的方法

权利要求书

1.一种提取质粒DNA的菌体裂解液，其特征在于：所述提取质粒DNA的菌体裂解液由裂解缓冲液、溶菌酶、RNase A组成，裂解缓冲液的组成为：每100mL裂解缓冲液中含有1.5~10g蔗糖、0.7~2.2g乙二胺四乙酸二钠、0.3~0.9g三（羟甲基）氨基甲烷盐酸盐、2.7~5.4gNH₄Cl、0.1~2.0mL 0.5%的Triton X-100、0.2~0.6g CaCl₂、0.5~8.0g盐酸胍、0.5~3.0g异硫氰酸胍，其余量为水，所述菌体裂解液的pH为5.0~8.0，在100mL提取质粒DNA的菌体裂解液中，溶菌酶的用量为250~350mg、RNase A的用量为15~25mg。

2.一种提取质粒DNA的试剂盒，其特征在于：包括菌体裂解液、漂洗液和洗脱液，所述菌体裂解液为权利要求1所述的提取质粒DNA的菌体裂解液。

3.根据权利要求2所述的提取质粒DNA的试剂盒，其特征在于：所述漂洗液包括漂洗液I和漂洗液II，所述漂洗液I的组成为：每100mL漂洗液I中含有19.1~76.4g盐酸胍、0.16~0.8g三（羟甲基）氨基甲烷盐酸盐、50~70mL的无水乙醇，其余量为水；所述漂洗液II的组成为：每100mL漂洗液II中含有0.05~0.15g NaCl、0.02~0.08g三（羟甲基）氨基甲烷盐酸盐、0.2~0.4g乙二胺四乙酸二钠、40~60mL的无水乙醇，其余量为水。

4.根据权利要求2或3所述的提取质粒DNA的试剂盒，其特征在于：所述洗脱液的组成为：每100mL洗脱液中含有0.2g三（羟甲基）氨基甲烷盐酸盐、0.04g乙二胺四乙酸二钠，其余量为水。

5.根据权利要求4所述的提取质粒DNA的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括硅基质吸附柱。

6.如权利要求2-5中任一项所述的提取质粒DNA的试剂盒提取质粒DNA的方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）菌体收集：从培养的菌液中收集菌体沉淀；

（2）菌体裂解：在菌体沉淀中加入预冷的菌体裂解液，混匀，悬浮菌体沉淀，得菌体裂解物；

（3）质粒DNA的纯化：将菌体裂解物室温静置30s~2min，离心，取上清转入硅基质吸附柱中，室温静置20s~2min；

（4）离心，弃废液，再向吸附柱中依次加入漂洗液Ⅰ、漂洗液Ⅱ进行漂洗，最后加入洗脱液，得到质粒DNA溶液。

7.根据权利要求6所述的提取质粒DNA的方法，其特征在于：步骤（3）所述的离心为4000~7000r/min离心20~50s。

8.根据权利要求6所述的提取质粒DNA的方法，其特征在于：步骤（4）所述的离心为10000~13000r/min离心20~50s。

9.根据权利要求6所述的提取质粒DNA的方法，其特征在于：步骤（4）所述的漂洗液I的用量为200~700μL，漂洗液II的用量为200~700μL、洗脱液的用量为40~100μL。