[发明专利]核酸合成方法

权利要求书

1.一种使用浸泡式反应方案进行核酸合成的方法，包括以下步骤：

a.提供其上固定有起始核酸分子的固体支持物，

b.将所述固体支持物浸泡在含有反应试剂TdT-dNTP的第一反应容器中，使所述起始核酸分子与TdT-dNTP充分反应，生成第一延伸产物；

c.将固体支持物浸泡在置于第二反应容器中的终止试剂中，以终止反应；

d.将固体支持物浸泡在置于第三反应容器中的切除试剂中，或将固体支持物暴露于光，以从第一延伸产物上切除TdT；

e.将固体支持物浸泡在置于第四反应容器中的洗涤试剂中进行洗涤、纯化得到延伸后的核酸分子；

f.任选地，重复步骤b至e。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述反应试剂TdT-dNTP选自TdT-dATP、TdT-dTTP、TdT-dCTP、TdT-dGTP、TdT-dUTP中的任一种，根据意欲合成的核酸分子的序列，在步骤b中将所述固体支持物浸泡在含有相应反应试剂TdT-dNTP的反应容器中。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述步骤b至e重复一次或多次，例如重复1、2、3、4、5、10、15、20、30、40、50、60、70、80、90、100或更多次。

4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，还包括：在合成完成后从合成的核酸分子中除去所述起始核酸分子。

5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其中所述反应试剂TdT-dNTP含有光可切割的接头，在步骤d中将固体支持物暴露于切除试剂后，TdT被切除。

6.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其中所述反应试剂TdT-dNTP含有化学可切割的接头，在步骤d中将固体支持物暴露于光后，TdT被切除。

7.根据权利要求1-6任一项所述的方法，其中，所述反应容器具有选自下列的一个或多个特征：

(a)所述反应容器为能够容纳试剂的装置或容器，例如槽、渠、孔、试管、杯、皿；

(b)所述反应容器具有期望的形状，例如方形、球形、锥形、圆柱体形、不规则形状、或其任何组合；

(c)所述反应容器具有期望的尺寸，例如能够容纳至少1μL、至少2μL、至少5μL、至少10μL、至少20μL、至少50μL、至少100μL、至少200μL、至少500μL、至少1mL、至少2mL、至少5mL、至少10mL、至少20mL、至少50mL、至少100mL、至少200mL、至少500mL、至少1L或更多的溶液；

(d)所述反应容器由不会不利地影响反应试剂的活性的材料制成，例如由玻璃、金属诸如不锈钢、聚合材料如塑料等制成；和

(e)所述反应容器是一端开口的。

8.根据权利要求1-7任一项所述的方法，其中，所述固体支持物具有选自下列的一个或多个特征：

(a)所述固体支持物由惰性材料制成；优选地，所述固体支持物由选自下列的材料制成：玻璃、陶瓷、金属(例如金颗粒)、硅片(硅晶)、聚四氟乙烯、乳胶、葡聚糖、聚苯乙烯(修饰或未经修饰的，例如聚乙二醇包覆的聚苯乙烯)、聚丙烯、聚酰胺(例如聚丙烯酰胺，聚二甲基丙烯酰胺)、聚乙二醇，或其任何组合；

(b)所述固体支持物具有期望的形状，例如片状，棱柱体形(例如长方体)、球形、锥体形、圆柱体形、不规则形状、或其任何组合；和

(c)所述固体支持物的表面为平面的或多孔的。