[发明专利]一种罗汉果苷的制备方法在审
| 申请号： | 201811466406.3 | 申请日： | 2018-12-03 |
| 公开（公告）号： | CN109517864A | 公开（公告）日： | 2019-03-26 |
| 发明（设计）人： | 吴旭日;卞柳云;花私齐 | 申请（专利权）人： | 中国药科大学 |
| 主分类号： | C12P19/56 | 分类号： | C12P19/56;C12N9/24 |
| 代理公司： | 南京艾普利德知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 32297 | 代理人： | 张铂 |
| 地址： | 211198 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 罗汉果苷 制备 罗汉果 糖基水解酶 罗汉果苷V 结构改造 生物合成 物质基础 绿色化 可用 水解 甜度 口味 | ||
1.一种罗汉果苷的制备方法，其特征在于使用糖苷水解酶EXG1和EXG19定点水解罗汉果苷V生物合成罗汉果苷ⅢE。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述的糖苷水解酶EXG1来源自酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae，序列如SEQ ID NO:1所示；糖苷水解酶EXG19为EXG1的突变体，序列如SEQ ID NO:2所示。
3.根据权利要求1所述的糖苷水解酶，其特征在于将EXG1和EXG19的编码基因插入大肠杆菌表达载体pET-22b(+)的多克隆位点，构建重组质粒pET-22b-exg1和pET-22b-exg19，转化至大肠杆菌BL21分别获得表达菌株E.coli(pET-22b-exg1)和E.coli(pET-22b-exg19)。
4.根据权利要求3所述的糖苷水解酶，其特征在于EXG1和EXG19的最佳蛋白可溶表达条件为温度15℃、诱导剂IPTG 0.4mM和诱导时间12小时。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于可用含EXG1或EXG19的大肠杆菌细胞提取液构建反应体系；或用含EXG1或EXG19的菌体构建原位或静息细胞反应体系。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于反应的pH为3.0-8.0，优选6.0；反应的温度为25-65℃，优选45℃；底物罗汉果苷V的浓度为1-10mg/mL，优选5mg/mL；反应时间为4-24小时，优选20小时；粗酶液(ml)与底物浓度(mg/ml)比值优选8：5。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于采用加热离心方法去除蛋白或菌体，上清液浓缩后用C18层析柱分离纯化获得高纯度罗汉果苷ⅢE。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于中国药科大学，未经中国药科大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201811466406.3/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
