[发明专利]一种检测沙门菌invA基因的金纳米比色传感器

说明书

本发明提供一种检测沙门菌invA基因的金纳米比色传感器，选用沙门菌高度保守的invA基因，设计与其特异性结合的探针，结合核酸循环放大技术，基于其信号放大作用，利用比色技术检测沙门菌invA基因，使得检测的线性范围达到0.74 pM～10 pM。本发明构建了简单、快速灵敏检测沙门菌的方法，在检测上不需要昂贵的仪器设备，具有检测简便快速、灵敏度高、检测成本低和现场检测等特点。

技术领域

本发明属于生物检测领域，具体涉及一种检测沙门菌invA基因的金纳米比色传感器。

背景技术

沙门氏菌属肠杆菌科，是革兰阴性肠道杆菌，它是食源性疾病中最重要的致病菌之一。沙门氏菌感染后主要引起食物中毒、胃肠炎、伤寒和副伤寒。有研究表明，沙门氏菌的侵袭蛋白与其致病性密切相关，决定着细菌进入宿主上皮细胞的能力。它主要由一系列基因编码，其中invA是编码沙门菌侵染上皮细胞表面蛋白的基因，与该菌致病性密切相关，是沙门菌特有的。

目前，最常用的肠道致病菌检测方法主要有三种：传统的分离培养鉴定、酶联免疫吸附法(ELISA)和聚合酶链式反应(PCR)。传统的分离培养鉴定法是将细菌分离培养后通过菌落计数和菌落形态、染色特征、生化反应等方法对细菌进行鉴定，该方法是细菌鉴定的金标准方法，但是其耗时费力。ELISA方法是基于抗原抗体反应的免疫学检测，与传统的分离培养鉴定方法相比较，缩短了检测时间，但是仍然需要细菌培养这一步，至少需要24～48小时才能得出准确的结果，而且该方法的检测限一般为≥10⁵CFU mL^-1，难以满足低浓度细菌的检测。PCR技术与上述两种方法相比较，优点是较高的灵敏度，但是PCR结果容易出现假阳性；目前实验室主要用凝胶电泳技术来检测PCR扩增的片段，但是凝胶电泳技术的分辨率较低且需要较高精确度的热循环仪，因此限制了PCR技术在实验室检测细菌的广泛运用。另一方法，不使用热循环仪的核酸依赖的扩增(NASBA)和自主序列复制系统(ASR)，在特异性上又大打折扣，主要是由于必须用一个相对较低的温度40℃来进行扩增。链置换扩增术(SDA)利用四种引物在等温条件下扩增，很大程度上克服了这些缺陷，但是仍然存在薄弱的环节：必须利用昂贵的修饰核苷酸作为底物来进行扩增反应。

发明内容

本发明的目的在于提供一种检测沙门菌invA基因的金纳米比色传感器，用于沙门菌invA基因的检测具有简便快速、灵敏度高、检测成本低等优点。

本发明的目的是这样实现的：

一种检测沙门菌invA基因的金纳米比色传感器，包括核酸循环放大反应体系和金纳米粒子聚集体系，其特征在于：所述核酸循环放大反应体系中包括针对沙门菌invA基因的茎环模板H1、辅助茎环模板H2和缓冲体系；所述茎环模板H1的序列如SEQ ID NO：1所示，所述辅助茎环模板H2的序列如SEQ ID NO：2所示。

SEQ ID NO：1(茎环模板H1)：5’-ATCGCATTTGAATGGACTAGG ATCAAATGCGAATTCCTAGAGACTGATTGGTT-3’。

SEQ ID NO：2(辅助茎环模板H2)：5’-ATGGACTAGGAATCGCATTT GATCCTAGTCCATTCAAATAGAACTGATTGGTT-3’。