[发明专利]一种呼吸道病原体多重检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种呼吸道病原体多重检测试剂盒，基于多重PCR技术，采用荧光能量共振转移通过熔解温度范围判定检测结果，可用于定性同时检测16种呼吸道病原体，包括12种RNA病毒(甲型流感病毒、乙型流感病毒、甲型H1N1流感病毒、呼吸道合胞病毒A型和B型、副流感病毒‑1/‑2/‑3型、冠状病毒OC43型、冠状病毒229E型、鼻病毒和人偏肺病毒)，2种DNA病毒(腺病毒和博卡病毒)以及2种细菌(肺炎支原体和百日咳鲍特菌)，具有检测灵敏度高，灵敏度甚至可高达1个拷贝/反应；特异性好，取样部位相同致病机理相似的非本试剂盒检测范围的病原体结果都为阴性；操作时间短且操作简单，结果清晰易判读等优点，可用于一个反应体系单管快速检测16种呼吸道病原体。

技术领域

本发明涉及呼吸道病原体的检测试剂盒，具体涉及一种呼吸道病原体多重检测试剂盒。

背景技术

急性呼吸道感染是成年人和儿童中最普遍的感染性疾病。呼吸道感染分为上呼吸道感染和下呼吸道感染。上呼吸道感染包括流涕、结膜炎、咽炎、窦炎等症状。病毒和细菌都能引起急性上呼吸道感染，由于病原体种类繁多，给诊断带来巨大挑战。目前呼吸道病原体检测的主要方法包括：病原体分离培养法、免疫法和分子检测法等。

病原体分离培养是呼吸道病原体检测方法的金标准，特异性高，但是灵敏度低，培养条件要求高并且易出现假阴性。免疫法的特异性高，但灵敏度较低，且往往不可用于疾病的早期诊断。

常用的呼吸道病原体分子检测手段有普通PCR、巢式PCR和荧光定量PCR。单重PCR是最早建立的PCR方法，只针对单个DNA模板进行检测，因此只能检测一种病原体，而目前市面上采用多重PCR方法的产品，目前仅能同时检测少数几种病原体，并且操作时间较长，操作繁琐。

发明内容

本发明的目的，就是为了解决上述问题而提供了一种灵敏度高、通量高、可靠性强、操作时间短且操作便捷的呼吸道病原体多重检测试剂盒。

本发明的目的是这样实现的：本发明的一种呼吸道病原体多重检测试剂盒，用于检测十六种呼吸道病原体，包括扩增引物组、特异引物组和探针：

所述扩增引物组由以下引物组成，其中

用于扩增呼吸道合胞病毒A型目标DNA片段的上下游引物的核苷酸序列如下所示：

F1：5’-TCCCATAATATACAAGTATTATCTC-3’；

R1：5’-AACCCAGTGAATTTATGATTAGC-3’；

用于扩增腺病毒目标DNA片段的上下游引物的核苷酸序列如下所示：

F2：5’-GACATGACCTTCGAGGTGGACCCCA-3’或

5’-GACATGACTTTTGAGGTGGATCCCA-3’；

R2：5’-TTATGTGGTGGCGTTGCCGGC-3’或

5’-TTACGTGGTAGCGTTACCGGC-3’；

用于扩增人偏肺病毒目标DNA片段的上下游引物的核苷酸序列如下所示：

F3：5’-CAAAGAGGCAAGAAAAACAAT-3’；

R3：5’-GCCTGGCTCTTCTGACTGTG-3’；

用于扩增呼吸道合胞病毒B型目标DNA片段的上下游引物的核苷酸序列如下所示：

F4：5’-TGTGGTATGCTATTAATCACTG-3’；

R4：5’-GGAGCCACTTCTCCCATCTC-3’；

用于扩增甲型流感病毒目标DNA片段的上下游引物的核苷酸序列如下所示：