[发明专利]一种适合质谱检测的样本前处理组合物、样本前处理方法及应用

权利要求书

1.一种适合质谱检测的样本前处理组合物，其由以下组件构成：

偶联有凝集素的载体和洗脱液，所述偶联有凝集素的载体用于特异性分离待测样本中的目标糖基化蛋白，所述洗脱液用于洗脱偶联有凝集素的载体上吸附的目标糖基化蛋白；其中：偶联有凝集素的载体包括磁珠；所述洗脱液包括分析纯级以上的甲酸铵、乙酸铵、甲酸、乙酸、氨水、碳酸氢铵、碳酸铵、乙腈中的任意一种的水溶液或两种以上的混合水溶液；

清洗液，用于清洗偶联有凝集素的载体上非特异性吸附的其他杂质；

人血白蛋白抗体-载体复合物，用于去除洗脱液中因非特异性结合而残留的微量人血白蛋白；每1000ml人血白蛋白抗体-载体复合物上至少偶联有1mg人血白蛋白抗体；

所述偶联有凝集素的载体由以下载体构成：偶联有小扁豆凝集素的载体、偶联有芸豆凝集素的载体、偶联有刀豆凝素A的载体和偶联有蜗牛凝集素的载体；偶联有小扁豆凝集素、芸豆凝集素、刀豆凝集素A和蜗牛凝集素的4种载体之间的体积比为1-2:1-2:1-2:1-2；

所述待测样本为人血清、血浆中的任意一种样本类型；

所述目标糖基化蛋白为：用于肝癌诊断的核心岩藻糖基化糖链结构异常蛋白AFP-L3、用于类风湿性关节炎早期诊断的IgG糖链结构异常蛋白IgG0、用于IgA肾病诊断的IgA糖链结构异常蛋白IgA1、用于妊娠反应和肿瘤标志物诊断的人绒毛膜促性腺激素HCG中的一种、两种、三种或四种；

其中：使用所述样本前处理组合物步骤为：

使用样本前处理组合物中的偶联有凝集素的载体分离待测样本中的目标糖基化蛋白；

使用样本前处理组合物中的清洗液，清洗偶联有凝集素的载体上非特异性吸附的其他杂质；

使用样本前处理组合物中的洗脱液，洗脱偶联有凝集素的载体上特异性吸附的糖基化蛋白的步骤；

使用样本前处理组合物中的人血白蛋白抗体-载体复合物去除洗脱液中因非特异性结合而残留的微量人血白蛋白（HSA）；

所述洗脱液洗脱获得的目标糖基化蛋白溶液直接用于质谱检测分析。

2.根据权利要求1所述样本前处理组合物，其特征在于，每1ml偶联有凝集素的载体上偶联有凝集素1-30mg。

3.根据权利要求1所述样本前处理组合物，其特征在于，偶联有凝集素的载体中磁珠的粒径分布范围为0.1μm-200μm。

4.根据权利要求1所述样本前处理组合物，其特征在于，偶联有凝集素的载体中磁珠的粒径分布范围为1μm-200μm或20μm-200μm。

5.根据权利要求4所述样本前处理组合物，其特征在于，偶联有凝集素的载体中所述磁珠包括表面经高分子材料处理形成的复合磁珠。

6.根据权利要求5所述样本前处理组合物，其特征在于，所述高分子材料为环氧树脂、聚苯乙烯、纤维素中的任意一种，或者任意两种或两种以上高分子材料的复合物。

7.根据权利要求1所述样本前处理组合物，其特征在于，所述偶联有凝集素的载体通过包括以下步骤的方法获得：将除去保存液后并清洗干净的磁珠与凝集素混合，震荡反应。

8.根据权利要求7所述样本前处理组合物，其特征在于，每1ml磁珠要加入1-30mg凝集素。

9.根据权利要求7所述样本前处理组合物，其特征在于，偶联有凝集素的载体中所述磁珠为表面经琼脂糖处理形成的琼脂糖磁珠。

10.根据权利要求7所述样本前处理组合物，其特征在于，震荡反应的条件为在0.1-1M、 pH 6-7、含0.1-0.5M NaCl的MES缓冲液，室温条件下震荡反应0.5-5h。

11.根据权利要求1所述样本前处理组合物，其特征在于，所述洗脱液为乙酸铵水溶液。

12.根据权利要求1所述样本前处理组合物，其特征在于，所述洗脱液的浓度为0.01%-1%。