[发明专利]分离核酸的方法

说明书

本公开涉及一种从含有核酸的样品中分离核酸的方法，该方法包括：(a)在允许样品中的核酸可逆地结合至基质的条件下，将样品暴露于热塑性聚合物基质；(b)在优先除去结合至所述基质的非核酸杂质的条件下，洗涤(a)中结合核酸的基质；以及(c)将(b)中洗涤的结合核酸的基质暴露于洗脱缓冲液，从而从基质中回收核酸。

技术领域

本发明总体上涉及一种分离核酸的方法，特别是一种从例如细胞裂解物的生物材料中分离核酸的方法。

背景技术

核酸(NA)的分离并非不重要，因为任何DNA/RNA测定法的性能都取决于NA输入的质量⁸。在医疗点(POC)应用中，由于现场可用资源的限制，NA分离过程更加复杂。例如，大多数常规的基于实验室的NA分离方案(基于Boom方法⁹)通常都需要使用离心机(例如，基于二氧化硅旋转柱的方法^9，10)。但是，在偏远地区或基于家庭的NA测定法中，可能无法使用离心机。因此，已经提出了各种策略来规避这种资源限制。一个示例是固相可逆的固定(SPRI)¹¹方法，该方法最近得到普及^11-15。SPRI通常基于NA在表面(例如微粒)上的沉淀，然后在酒精洗涤后可以将其重新悬浮在相容的缓冲液中。SPRI需要最少的设备，因此更适合POC应用。然而，常规的SPRI受到需要多个样品/液体操纵的限制。此后，已经开发出了各种策略使SPRI自动化¹⁶，但是大多数定制的POC方法都需要某种形式的微设备^13，17-19，这对于低资源的配置并不适合。其他现代的NA分离方法²⁰包括使用电脉冲来操纵细胞裂解、NA分离和浓缩。但是，这些方法仍在很大程度上是概念验证和/或需要非常专业的设备，

在SPRI的某些迭代中，已经探索了各种形式的微粒表面修饰。这些修饰包括羧酸¹¹、纤维素^14，15、二氧化硅(Boom方法的扩展)和壳聚糖¹³。通常，具有正电荷(阳离子)官能团的生物相容性基质可用于NA分离。另外，一些利用DNA功能化塑料表面的策略包括非特异性的物理吸附²¹。但是，NA的物理吸附通常在NA测定法中起相反的作用，因为它减少了生物分析靶标的可用性。

本公开通过提供与低资源和/或POC应用相容的更简单的核酸固相可逆固定方法来解决或至少部分缓解了这些问题。

发明内容

在本文公开的一个方面，提供了一种从含有核酸的样品中分离核酸的方法，所述方法包括：

(a)在允许样品中的核酸可逆地结合至基质的条件下，将样品暴露于热塑性聚合物基质，

(b)在优先除去结合至所述基质的非核酸杂质的条件下，洗涤(a)中结合核酸的基质；和

(c)将(b)中洗涤的结合核酸的基质暴露于洗脱缓冲液，从而从基质中回收核酸；

其中热塑性聚合物基质在溶液中具有净负电荷。

在另一方面，提供了一种包含通过本文公开的方法回收的核酸的组合物。

在另一方面，提供了一种用于从含有核酸的样品中分离核酸的试剂盒，所述试剂盒包含：

(a)如本文所述的热塑性聚合物基质；

(b)如本文所述的洗脱缓冲液；和

(c)任选地，如本文所述的细胞裂解缓冲液；

其中热塑性聚合物基质在溶液中具有净负电荷。

在另一方面，提供了如本文所述的热塑性聚合物基质，其用于根据本文公开的方法从含有核酸的样品中分离核酸，其中当暴露于样品时，热塑性聚合物基质具有净负电荷。

附图说明