[发明专利]一种α-转氨酶突变体及其在不对称合成L-草铵膦中的应用有效
| 申请号： | 201910032171.5 | 申请日： | 2019-01-14 |
| 公开（公告）号： | CN109609477B | 公开（公告）日： | 2022-02-18 |
| 发明（设计）人： | 薛亚平;贾东旭;郑裕国;刘子健;徐海鹏;李军良;金利群;柳志强;程峰 | 申请（专利权）人： | 浙江工业大学 |
| 主分类号： | C12N9/10 | 分类号： | C12N9/10;C12N15/54;C12P13/04 |
| 代理公司： | 浙江千克知识产权代理有限公司 33246 | 代理人： | 冷红梅 |
| 地址： | 310014 *** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 转氨酶 突变体 及其 不对称 合成 草铵膦 中的 应用 | ||
1.一种α-转氨酶突变体，其特征在于所述突变体为下列之一：
（1）序列如SEQ ID NO：1所示的氨基酸第52位脯氨酸突变为缬氨酸；
（2）序列如SEQ ID NO：1所示的氨基酸第52位脯氨酸突变为缬氨酸，第71位天冬氨酸突变为亮氨酸；
（3）序列如SEQ ID NO：1所示的氨基酸第52位脯氨酸突变为缬氨酸，第71位天冬氨酸突变为亮氨酸，第81位丙氨酸突变为丝氨酸；
（4）序列如SEQ ID NO：1所示的氨基酸第52位脯氨酸突变为缬氨酸，第71位天冬氨酸突变为亮氨酸，第81位丙氨酸突变为丝氨酸，第153位苏氨酸突变为精氨酸；
（5）序列如SEQ ID NO：1所示的氨基酸第52位脯氨酸突变为缬氨酸，第71位天冬氨酸突变为亮氨酸，第81位丙氨酸突变为丝氨酸，第153位苏氨酸突变为精氨酸，第168位天冬酰胺突变为脯氨酸；
（6）序列如SEQ ID NO：1所示的氨基酸第52位脯氨酸突变为缬氨酸，第71位天冬氨酸突变为亮氨酸，第81位丙氨酸突变为丝氨酸，第153位苏氨酸突变为精氨酸，第168位天冬酰胺突变为脯氨酸，第324位天冬氨酸突变为缬氨酸；
（7）序列如SEQ ID NO：1所示的氨基酸第52位脯氨酸突变为缬氨酸，第71位天冬氨酸突变为亮氨酸，第81位丙氨酸突变为丝氨酸，第153位苏氨酸突变为精氨酸，第168位天冬酰胺突变为脯氨酸，第324位天冬氨酸突变为缬氨酸，第341位丙氨酸突变为亮氨酸；
（8）序列如SEQ ID NO：1所示的氨基酸第52位脯氨酸突变为缬氨酸，第71位天冬氨酸突变为亮氨酸，第81位丙氨酸突变为丝氨酸，第153位苏氨酸突变为精氨酸，第168位天冬酰胺突变为脯氨酸，第324位天冬氨酸突变为缬氨酸，第341位丙氨酸突变为亮氨酸，第361位半胱氨酸突变为异亮氨酸。
2.如权利要求1所述的α-转氨酶突变体，其特征在于所述α-转氨酶突变体氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示。
3.权利要求1所述的α-转氨酶突变体在催化草铵膦前体酮不对称合成L-草铵膦中的应用。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述应用为：以含所述α-转氨酶突变体编码基因的重组基因工程菌经发酵培养获得的湿菌体或湿菌体经超声破碎后获得的上清液作为催化剂，以草铵膦前体酮PPO为底物，以磷酸吡哆醛为辅酶，以天然氨基酸为氨基供体，在pH8.0 Tris-HCl缓冲液中，32~77℃、400~600 r/min条件下反应，反应结束后，反应液分离纯化，获得L-草铵膦。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述α-转氨酶突变体编码基因序列如SEQ IDNO.4所示。
6.如权利要求4所述的应用，其特征在于反应体系中，底物初始浓度为20~800 mM，湿菌体用量为10~100 g/L，辅酶用量为0~1 mM。
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