[发明专利]α-转氨酶及突变体以及在不对称合成L-草铵膦中的应用

权利要求书

1.一种α-转氨酶突变体，其特征在于所述α-转氨酶突变体由序列如SEQ ID NO：5所示的氨基酸经下列之一的单点或多点突变而得：（1）第124位谷氨酰胺突变为亮氨酸，（2）第124位谷氨酰胺突变为亮氨酸+第144位精氨酸突变为谷氨酸，（3）第124位谷氨酰胺突变为亮氨酸+第144位精氨酸突变为谷氨酸+第237位脯氨酸突变为苏氨酸，（4）第124位谷氨酰胺突变为亮氨酸+第144位精氨酸突变为谷氨酸+第237位脯氨酸突变为苏氨酸+第250位苯丙氨酸突变为天冬酰胺，（5）第124位谷氨酰胺突变为亮氨酸+第144位精氨酸突变为谷氨酸+第237位脯氨酸突变为苏氨酸+第250位苯丙氨酸突变为天冬酰胺+第328位丙氨酸突变为酪氨酸。

2.如权利要求1所述的α-转氨酶突变体，其特征在于所述α-转氨酶突变体氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示。

3.权利要求1或2所述的α-转氨酶突变体在催化草铵膦前体酮不对称合成L-草铵膦中的应用。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述应用为：以含所述α-转氨酶突变体编码基因的重组基因工程菌经发酵培养获得的湿菌体或湿菌体经超声破碎后获得的上清液作为催化剂，以草铵膦前体酮PPO为底物，以磷酸吡哆醛为辅酶，以天然氨基酸或无机胺为氨基供体，在pH8.0 Tris-HCl缓冲液中，32~77℃、400~600 r/min条件下反应，反应结束后，反应液分离纯化，获得L-草铵膦。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述α-转氨酶突变体编码基因序列如SEQ IDNO.8所示。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于反应体系中，底物初始浓度为20~800 mM，湿菌体用量为10~100 g/L，辅酶用量为0~1 mM。