[发明专利]用于肝癌筛查的尿液外泌体磷脂标志物及其试剂盒有效
申请号: | 201910221864.9 | 申请日: | 2019-03-22 |
公开(公告)号: | CN109932511B | 公开(公告)日: | 2020-02-04 |
发明(设计)人: | 王小中;钟琼慧;刘静;林晋;陈焕文 | 申请(专利权)人: | 南昌大学第二附属医院 |
主分类号: | G01N33/574 | 分类号: | G01N33/574;G01N27/62 |
代理公司: | 11350 北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙) | 代理人: | 汤东凤 |
地址: | 330006*** | 国省代码: | 江西;36 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 磷脂 标志物 肝癌 试剂盒 尿液 诊断 代谢组学 辅助诊断 有效生物 筛查 制备 应用 | ||
1.尿液外泌体磷脂标志物[SM (18:1/18:0)+Na]+、[PC(18:1/18:1)+H]+、[PC(20:4/18:0)+Na]+和[PC(20:4/20:0)+K]+用于制备诊断肝细胞癌试剂盒中的用途,并且所述诊断包括以下步骤:
(a)测定怀疑患有肝细胞癌的受试者的尿液样品中外泌体[SM(18:1/18:0)+Na]+、[PC(18:1/18:1)+H]+、[PC(20:4/18:0)+Na]+和[PC(20:4/20:0)+K]+的相对丰度;和
(b)根据[SM (18:1/18:0)+Na]+、[PC(18:1/18:1)+H]+、[PC(20:4/18:0)+Na]+和[PC(20:4/20:0)+K]+的相对丰度,评估该受试者是否患有肝细胞癌;
所述评估包括将所测定的[SM (18:1/18:0)+Na]+、[PC(18:1/18:1)+H]+、[PC(20:4/18:0)+Na]+和[PC(20:4/20:0)+K]+相对丰度与已知未患有肝细胞癌的受试者中[SM (18:1/18:0)+Na]+、[PC(18:1/18:1)+H]+、[PC(20:4/18:0)+Na]+和[PC(20:4/20:0)+K]+的相对丰度或预确定的阈值进行比较,当SM (18:1/18:0)+Na]+的相对丰度增加,且[PC(18:1/18:1)+H]+、[PC(20:4/18:0) +Na]+和 [PC(20:4/20:0) +K]+的相对丰度减少时指示该受试者患有肝细胞癌。
2.根据权利要求1所述的用途,其中所述已知未患有肝细胞癌的受试者是指肝功能正常,排除肝脏疾病及其他器质性疾病的受试者。
3.根据权利要求1所述的用途,其中所述尿液是晨尿。
4.根据权利要求3所述的用途,其中所述晨尿是排除对磷脂成分检测有影响的乳糜尿液标本。
5.根据权利要求1所述的用途,其中所述尿液样品中外泌体的获得方法为:收集晨尿标本,利用差速离心法结合试剂法提取尿液中的外泌体。
6.根据权利要求5所述的用途,其中所述差速离心法结合试剂法是依次利用500g、2000g和16000g差速离心尿液样本,16000g离心后的底部沉渣中加入200 mg / ml二硫苏糖醇(DTT)溶液以提高外泌体产量,上清液浓缩至15ml,后加入1/5尿液体积的外泌体提取试剂。
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