[发明专利]一种克氏原螯虾C型凝集素gLecB基因及其编码的gLecB蛋白

说明书

本发明属于基因工程技术领域，公开了一种克氏原螯虾C型凝集素gLecB基因及其编码的gLecB蛋白，所述克氏原螯虾C型凝集素gLecB基因的序列为SEQ ID NO：1；gLecB蛋白氨基酸序列为SEQ ID NO：2；表达载体为pGEX‑5X‑1‑B‑Lectin。本发明主要是分离出了克氏原螯虾体内一种新的C型凝集素gLecB，且具有抗病毒作用。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，尤其涉及一种克氏原螯虾C型凝集素gLecB基因及其编码的gLecB蛋白。

背景技术

目前，业内常用的现有技术是这样的：

由于缺少基于“抗体-抗原识别”的特异性免疫机制，虾、蟹等无脊椎动物仅依赖种系基因编码的模式识别受体PRRs以及相关的免疫调控系统来抵御病原侵袭。免疫识别是免疫反应的第一步，无脊椎动物主要是依靠模式识别受体PRRs(pattern recognitionreceptors)来识别入侵的病原，也就是前述的这些病原相关的分子模式PAMPs作为配体能够被模式识别受体PRRs识别。PRRs一方面可以直接杀死清除病原菌，另外一方面可以激活相应的下游信号通路，然后诱导表达相应的抗菌肽来抵抗病原菌的入侵。

模式识别受体PRRs可以分为膜受体、分泌性受体和细胞质受体三大类。其中膜受体包括Toll样受体(Toll-like receptors)和清道夫受体SRs(scavenger receptors)等；分泌性受体包括肽聚糖结合蛋白(peptidoglycan)、凝集素(lectin)和脂多糖结合蛋白(lipopolysaccharide and b-1,3-glucan binding protein)等；细胞质受体的代表是Nod样受体。

凝集素是一类非常重要的分泌性受体，每种凝集素都含有糖类识别结构域CRD(carbohydrate recognition domain)，具有结合糖类的性质，同时凝集素参与了多种生理过程，包括蛋白质的运输、信号转导、病原的识别或者作为免疫效应分子，不同类型的凝集素的CRDs具有不同的结构。位于细胞内的凝集素主要参与蛋白的筛选和运输，位于细胞外的凝集素主要参与了细胞信号传导和病原的识别^[1]。位于细胞内参与蛋白运输的凝集素包括L型凝集素等^[2-3]，位于细胞外参与细胞信号传导和病源识别的包括C型凝集素等^[4]。目前，从对虾中已经鉴定出了7种凝集素，分别为C-型凝集素、L-型凝集素、P-型凝集素、M-型凝集素、纤维蛋白原样结构域凝集素、半乳凝素和钙联接蛋白/钙网织蛋白。

C-型凝集素是一类含有钙离子依赖糖识别域CRD的蛋白超家族，在脊椎动物中结构高度保守，但是在无脊椎动物中却表现出一定的多样性。目前有关虾的C-型凝集素的研究报道和相关文献都特别丰富：已经在中国明对虾体内分离出的C-型凝集素有Fclectin、Fc-hsl、Fc-Lec2、Fc-Lec3、Fc-Lec4和Fc-Lec5^[4-9]；南美白对虾的LvLT、LvLec、LvCTL1、LvCTL和LvCTLD^[10-13]以及日本囊对虾的MjLecA、MjLecB和MjLecC也有相关研究报道^[14]，特别地，关于日本囊对虾的一种C-型凝集素MjCC-CL的研究，说明凝集素不仅可以作为一种模式识别受体，而且还具有效应分子的作用^[15]。对于克氏原螯虾，PcLT是第一个报道的C-型凝集素，接着PcLec1、PcLec2、PcLec3、PcLec4、PcLec5和PcLec6陆续被报道^[16-21]。其中研究人员发现PcLec4不仅是一种模式识别受体，而且还是一种免疫信号开关分子，为解释免疫调控中的信号交叉与传导延迟现象提供了新的依据，并提出C-型凝集素作为分子开关参与免疫反应的假设^[19]。