[发明专利]一种牛病毒性腹泻病毒的乳胶凝集检测方法及应用

权利要求书

1.一种牛病毒性腹泻病毒（BVDV）抗体乳胶凝集检测方法，其特征是所述检测试剂是能够与牛病毒性腹泻阳性血清发生特异性反应的乳胶抗原液。

2.根据权利要求1中所述检测方法，其特征在于乳胶抗原液是从牛病毒性腹泻病毒中提取的E0蛋白致敏羧化聚苯乙烯乳胶。

3.乳胶抗原液制备过程如下：

（一）牛病毒性腹泻病毒E0蛋白的制备；

（二）E0蛋白致敏羧化聚苯乙烯乳胶抗原液的制备。

4.根据权利要求2中所述检测方法，其特征在于，所述牛病毒性腹泻病毒E0蛋白的制备过程：构建成功的pET32a-E0进行蛋白的诱导表达，进一步进行E0蛋白的分离纯化。

5.根据权利要求3中所述检测方法，其特征在于，所述蛋白的诱导表达条件为：将重组菌在37 ℃培养2-3 h，测OD₆₀₀在0.5~ 1.0，加入IPTG使终浓度为0.05 mM，16 ℃诱导12 h。

6.根据权利要求2中所述检测方法，其特征在于，所述的重组蛋白E0致敏羧化乳胶试剂的制备方法如下：

（一）碳化二亚胺（EDC）活化带有羧基基团（-COOH）的乳胶微球；

（二）利用权利要求3中所述纯化后的E0蛋白致敏活化后的羧化乳胶微球，制备乳胶抗原液。

7.根据权利要求5中所述检测方法，其特征在于，所述E0蛋白致敏活化后的羧化乳胶微球的条件为：1mL 2%羧化乳胶，加入E0蛋白量为50μg，偶联时间为2h，加入3%BSA封闭。

8.权利要求1中所述的乳胶凝集检测方法在体外检测牛病毒性腹泻抗体的应用。