[发明专利]一种新的细胞冻存方法在审
| 申请号： | 201910674185.7 | 申请日： | 2019-07-25 |
| 公开（公告）号： | CN110301432A | 公开（公告）日： | 2019-10-08 |
| 发明（设计）人： | 王金涛;向洋 | 申请（专利权）人： | 上海轩锋生物科技有限公司 |
| 主分类号： | A01N1/02 | 分类号： | A01N1/02 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 200120 上海市*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 细胞冻存 冻存管 冻存液 冻存 超低温冰箱 程序降温盒 细胞冻存液 细胞 过滤除菌 溶液离心 细胞转移 悬浮细胞 学术意义 液氮环境 降温盒 分装 滤头 液氮 配置 洗涤 储存 复苏 期望 | ||
【权利要求书】：
1.一种新的细胞冻存方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1、配置细胞冻存液，所述细胞冻存液包括：DMSO7.5％，维生素C 109mg/L，海藻多糖72mg/L，香菇多糖45mg/L，人血清白蛋白500mg/L，高糖DMEM92.5％；
步骤2、将步骤1中配置好的冻存液使用滤头过滤除菌，置于4℃的储存环境中预冷待用；
步骤3、对需要进行冻存的细胞进行计数；
步骤4、对PBMC进行分离，并将分离好的PBMC使用PBS洗涤两遍，取400g洗涤后的溶液离心5分钟，弃去上清；
步骤5、使用步骤2中的冻存液充分悬浮细胞至期望浓度，然后分装至冻存管；
步骤6、将冻存管置于程序降温盒中，然后将降温盒转移到超低温冰箱中；
步骤7、三小时后，将细胞转移到液氮中，整个转移过程应在液氮环境下进行。
2.根据权利要求1所述的一种新的细胞冻存方法，其特征在于：所述步骤2中的滤头为0.22μm的滤头。
3.根据权利要求1所述的一种新的细胞冻存方法，其特征在于：所述步骤4中的对PBMC进行分离的分离方法为：将人外周血转入离心管中离心；吸取灰黄层，向其中加入生理盐水稀释；将加入生理盐水稀释得到的产物送入含有淋巴细胞分离液的离心管中，其中加入生理盐水稀释到的产物位于淋巴细胞分离液上层；离心分离，吸取中间白膜层，洗涤，离心弃上清，得到分离的PBMC。
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