[发明专利]一种新的细胞冻存方法

说明书

本发明提供了一种新的细胞冻存方法，包括以下步骤：配置细胞冻存液；将配置好的冻存液使用滤头过滤除菌，置于4℃的储存环境中预冷待用；对需要进行冻存的细胞进行计数；对PBMC进行分离，并将分离好的PBMC使用PBS洗涤两遍，取400g洗涤后的溶液离心5分钟，弃去上清；使用冻存液充分悬浮细胞至期望浓度，然后分装至冻存管；将冻存管置于程序降温盒中，然后将降温盒转移到超低温冰箱中；三小时后，将细胞转移到液氮中，整个转移过程应在液氮环境下进行。本发明所包含的冻存方法使复苏后的PBMC中，NK细胞的活力大幅提高，可以为下游的实验提供优质的细胞。有很大的学术意义。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体为一种新的细胞冻存方法。

背景技术

细胞的冻存是保存细胞的主要方法，将细胞冻存后保存在液氮中，可以使细胞暂时性的脱离生长状态而将其细胞特性保存起来。在需要的时候再复苏细胞用于实验。而且适度地保存一定量的细胞，可以防止因正在培养的细胞被污染或其他意外事件而使细胞丢种，起到了细胞保种的作用。除此之外，还可以利用细胞冻存的形式来购买、寄赠、交换和运送某些细胞。但是不同的细胞的冷冻条件是不一样的，其复苏结果也各不相同，许多细胞复苏后细胞活性较低。

发明内容

本发明所解决的技术问题在于提供一种新的细胞冻存方法，以解决上述背景技术中的问题。

本发明所解决的技术问题采用以下技术方案来实现：一种新的细胞冻存方法，包括以下步骤：

步骤1、配置细胞冻存液，所述细胞冻存液包括：DMSO 7.5％，维生素C 109mg/L，海藻多糖72mg/L，香菇多糖45mg/L，人血清白蛋白500mg/L，高糖DMEM 92.5％；

步骤2、将步骤1中配置好的冻存液使用滤头过滤除菌，置于4℃的储存环境中预冷待用；

步骤3、对需要进行冻存的细胞进行计数；

步骤4、对PBMC进行分离，并将分离好的PBMC使用PBS洗涤两遍，取400g洗涤后的溶液离心5分钟，弃去上清；

步骤5、使用步骤2中的冻存液充分悬浮细胞至期望浓度，然后分装至冻存管；

步骤6、将冻存管置于程序降温盒中，然后将降温盒转移到超低温冰箱中；

步骤7、三小时后，将细胞转移到液氮中，整个转移过程应在液氮环境下进行。

优选的，所述步骤2中的滤头为0.22μm的滤头。

优选的，所述步骤4中的对PBMC进行分离的分离方法为：将人外周血转入离心管中离心；吸取灰黄层，向其中加入生理盐水稀释；将加入生理盐水稀释得到的产物送入含有淋巴细胞分离液的离心管中，其中加入生理盐水稀释到的产物位于淋巴细胞分离液上层；离心分离，吸取中间白膜层，洗涤，离心弃上清，得到分离的PBMC。

与已公开技术相比，本发明存在以下优点：本发明所包含的冻存方法使复苏后的PBMC中，NK细胞的活力大幅提高，可以为下游的实验提供优质的细胞。有很大的学术意义。

具体实施方式

为了使本发明的技术手段、创作特征、工作流程、使用方法达成目的与功效易于明白了解，下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

一种新的细胞冻存方法，包括以下步骤：