[发明专利]一种样品中铵态氮、硝酸态氮、亚硝酸态氮以及总溶解态氮的测定方法

说明书

本发明提供了一种样品中铵态氮、硝酸态氮、亚硝酸态氮以及总溶解态氮的测定方法，属于氮含量测定技术领域。本发明在测定铵态氮时，采用了新的氧化剂(次氯酸钠和氯代异氰尿酸钠)和显色剂(水杨酸)体系，将铵态氮在氧化剂的作用下氧化为单氯胺，形成的单氯胺与显色剂形成靛酚，通过测定660nm处的紫外吸光度进行测量；在进行硝酸态氮、亚硝酸态氮和总溶解态氮测量时采用新的第一Griess试剂(N‑(1‑萘基)乙二胺二盐酸盐)和第二Griess试剂体系(磺胺和氯化钒)，进行测量，检出限低、灵敏度高。上述显色反应速度稳定、均一，能够在96孔板上进行。

技术领域

本发明涉及氮含量检测技术领域，尤其涉及一种样品中铵态氮、硝酸态氮、亚硝酸态氮以及总溶解态氮的测定方法。

背景技术

现有技术中测定土壤中的氮含量的方法主要依赖于普通的紫外-可见分光光度计，每次只能测定有限的几个样品。而且，受限于测定过程中反应的速度以及均一性，无法在96孔板(酶标仪)上实现。另外，单纯依赖普通的紫外-可见分光光度计法进行测量，检出限和准确度均有待提高。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种样品中铵态氮、硝酸态氮、亚硝酸态氮以及总溶解态氮的测定方法，本发明的测定方法采用了新的氧化剂和显色剂，实现了利用96孔板(酶标仪)来测定样品中各种形态氮，且该方法具有较好的检出限和准确度，实现了氮的高通量测定。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种样品中铵态氮、硝酸态氮、亚硝酸态氮以及总溶解态氮的测定方法，包括以下步骤：

标准曲线的建立：所述标准曲线包括铵态氮浓度-吸光度标准曲线、硝酸态氮浓度-吸光度标准曲线、亚硝酸态氮浓度-吸光度标准曲线和总溶解态氮浓度-吸光度标准曲线；

所述铵态氮浓度-吸光度标准曲线的建立包括以下步骤：

配制铵态氮标准溶液，将所述铵态氮标准溶液、氧化剂和显色剂混合、显色，测定660nm处的吸光度，得到铵态氮浓度-吸光度标准曲线；所述氧化剂为次氯酸钠和氯代异氰尿酸钠的水溶液，所述显色剂为水杨酸的氢氧化钠水溶液；

所述硝酸态氮浓度-吸光度标准曲线的建立包括以下步骤：

配制硝酸态氮标准溶液，将所述硝酸态氮标准溶液、硝酸盐还原酶、第一Griess试剂和第二Griess试剂混合、显色，测定540nm处的吸光度，得到硝酸态氮浓度-吸光度标准曲线；所述第一Griess试剂为N-(1-萘基)乙二胺二盐酸盐水溶液，所述第二Griess试剂为磺胺和氯化钒的盐酸水溶液；

所述亚硝酸态氮浓度-吸光度标准曲线的建立包括以下步骤：

配制亚硝酸态氮标准溶液，将所述亚硝酸态氮标准溶液、第一Griess试剂和第二Griess试剂混合、显色，测定540nm处的吸光度，得到亚硝酸态氮浓度-吸光度标准曲线；

所述总溶解态氮浓度-吸光度标准曲线的建立包括以下步骤：

配制总溶解态氮标准溶液，将所述总溶解态氮标准溶液、过硫酸盐氧化剂和水混合，得到消解液；将所述消解液、硝酸盐还原酶、第一Griess试剂和第二Griess试剂混合、显色，测定540nm处的吸光度，得到总溶解态氮浓度-吸光度标准曲线；

待测样品中铵态氮、硝酸态氮、亚硝酸态氮以及总溶解态氮的测定：

将所述待测样品配制成待测样品溶液，将所述待测样品溶液按照各标准曲线建立时的显色反应进行显色，得到相应氮形态的吸光度，根据相应的标准曲线，获得标准曲线测铵态氮含量、标准曲线测硝酸态氮含量、标准曲线测亚硝酸态氮含量和标准曲线测总溶解态氮含量；