[发明专利]以LppA基因为检测靶标进行牛支原体检测的组合物、试剂盒和方法

权利要求书

1.一种用于检测牛支原体的组合物，其特征在于，包括能够与牛支原体的LppA基因杂交的第一寡核苷酸、第二寡核苷酸、第三寡核苷酸和溶解所述第一寡核苷酸和第二寡核苷酸的缓冲液，其中：所述第一寡核苷酸与所述LppA基因的第一区域选择性杂交，所述第二寡核苷酸与所述LppA基因的第二区域选择性杂交，且所述第一区域位于所述LppA基因的5’端侧，所述第二区域位于所述LppA基因的3’端侧，所述第一区域与所述第二区域之间的距离在50bp-2000bp之间，所述第三寡核苷酸的3’端带有终止磷酸基团和位于所述第三寡核苷酸中间第31至32的THF切割位点，所述第一寡核苷酸的序列如SEQ ID No.2所示，所述第二寡核苷酸的序列如SEQ ID No.3所示，其序列为(Biotin)TAGTAAGCGAGCCGTAAAACGGATAAACTATAGC TTTG，所述第三寡核苷酸的序列如SEQ ID No.4所示，其序列为(FAM)CAAGCATAAATAATCCAAATAAGCTACGTTT/idSp/GTCAGGTATTTGTTTAC(P)，所述缓冲液的pH为6.9-7.0，且所述第一寡核苷酸和所述第二寡核苷酸在所述缓冲液中的浓度各自分别为0.5-1μmol/L。

2.根据权利要求1所述的用于检测牛支原体的组合物，其特征在于，所述LppA基因的序列如SEQ ID No.1所示。

3.根据权利要求1所述的用于检测牛支原体的组合物，其特征在于，所述第三寡核苷酸与所述LppA基因的第三区域选择性杂交，所述第三区域位于所述第一区域和所述第二区域之间。

4.根据权利要求3所述的用于检测牛支原体的组合物，其特征在于，所述第一寡核苷酸的长度为35-45nt；所述第二寡核苷酸的长度为35-50nt；所述第三寡核苷酸的长度为40-55nt。

5.一种用于检测牛支原体的试剂盒，其特征在于，包括根据权利要求1-4任一项所述的组合物。

6.试剂在制备用于通过下述方法检测牛支原体的试剂盒中的用途，其特征在于，所述试剂包括权利要求1-4任一项所述的组合物；

检测方法包括以下步骤：

(1)提供来源于牛的生物样本的模板；

(2)使所述模板与根据权利要求1-4任一项所述的组合物组成反应体系，在34℃～42℃下使所述反应体系反应5～20分钟得到扩增产物；

(3)检测扩增产物。

7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于，所述检测扩增产物包括使扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳的步骤。

8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述检测扩增产物包括使扩增产物与带有标记的测流层析试纸条接触，当在检测线和质控线处都显示红色时，判定所述生物样本为阳性样本，当在质控线处显示红色而检测线未显色时，判定所述生物样本为阴性样本，当质控线不显示红色时证明试纸条失效。