[发明专利]一种诱导粉葛丛生芽的方法

权利要求书

1.一种诱导粉葛丛生芽的方法，包括外植体材料的获取、灭菌条件的筛选、启动培养条件探索、丛生芽诱导条件探索，其特征在于：包括以下步骤：

（1）外植体获取：取粉葛藤于冬季扦插于温室中，定期浇水，来年的3~4月份，选择健壮的植株，待新长出的嫩枝带有4~5个节的时候，剪下作为外植体；

（2）灭菌条件筛选：将健壮的嫩枝放入洗洁精和84消毒液混合溶液中浸泡10 min，然后用软毛刷蘸取洗洁精水刷洗表面，特别是茎的分支处需特别清洗，之后用自来水清洗干净，再用纯水清洗一次，装入无菌瓶中；将洗好的外植体置于超净工作台上，用75%乙醇溶液浸泡30 s，无菌水清洗2次后，用0.1%升汞溶液或2%次氯酸钠溶液灭菌8~10 min，加入表面活性剂吐温80，用无菌水清洗5次；

（3）启动培养条件探索：将灭菌处理后的粉葛枝条切成1.5cm左右的带节茎段，多余部分去除，将切好的茎段接种到启动培养基中；所述启动培养基组成是MS+6-BA0.5 mg/L +NAA0.1 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂4 g/L+活性炭0.2 g/L，pH值为5.8；经过28 d的培养后获得无菌新芽；

（4）丛生芽诱导条件探索：将启动培养阶段获得的无菌嫩芽转接到丛生芽诱导培养基中，所述的丛生芽诱导培养基组成是MS+TDZ1.5 mg/L+NAA1.0 mg/L+水解酪蛋白200 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂4 g/L+活性炭0.2 g/L，pH值为5.8；经过28 d的培养后获得丛生芽；

所述步骤（3）和步骤（4）中，培养条件为：温度条件为23~25 ℃、光照条件为2500 Lx、每天光照12 h、湿度为50~60%的培养室中，培养28 d。

2.根据权利要求1所述的一种诱导粉葛丛生芽的方法，其特征在于：所述步骤（1）中，外植体为1~2年生的且来源于广西藤县的葛藤。

3.根据权利要求1所述的一种诱导粉葛丛生芽的方法，其特征在于：所述步骤（1）中，扦插的基质由表土和腐殖土混合而成，其中表土为黄壤土，腐殖土为当地松林下的表层黑色腐殖土壤；所述的表土和腐植土的体积比为2:1~3:1。

4.根据权利要求1所述的一种诱导粉葛丛生芽的方法，其特征在于：所述步骤（2）中，灭菌条件为：用75%乙醇溶液浸泡30 s，无菌水清洗2次后，用0.1%升汞溶液灭菌10 min，加入表面活性剂吐温80，用无菌水清洗5次。

5.一种诱导粉葛丛生芽的方法，包括外植体材料的获取、灭菌条件的筛选、启动培养条件探索、丛生芽诱导条件探索，其特征在于：包括以下步骤：

（1）外植体获取：取粉葛藤于冬季扦插于温室中，定期浇水，来年的3~4月份，选择健壮的植株，待新长出的嫩枝带有4~5个节的时候，剪下作为外植体；

（2）灭菌条件筛选：将健壮的嫩枝放入洗洁精和84消毒液混合溶液中浸泡10 min，然后用软毛刷蘸取洗洁精水刷洗表面，特别是茎的分支处需特别清洗，之后用自来水清洗干净，再用纯水清洗一次，装入无菌瓶中；将洗好的外植体置于超净工作台上，用75%乙醇溶液浸泡30 s，无菌水清洗2次后，用0.1%升汞溶液或2%次氯酸钠溶液灭菌8~10 min，用无菌水清洗5次；

（3）启动培养条件探索：将灭菌处理后的粉葛枝条切成1.5cm左右的带节茎段，多余部分去除，将切好的茎段接种到启动培养基中；所述启动培养基组成是MS+6-BA0.5 mg/L +NAA0.1 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂4 g/L+活性炭0.2 g/L，pH值为5.8；经过28 d的培养后获得无菌新芽；

（4）丛生芽诱导条件探索：将启动培养阶段获得的无菌嫩芽转接到丛生芽诱导培养基中，所述的丛生芽诱导培养基组成是MS+TDZ1.5 mg/L+NAA1.0 mg/L+水解酪蛋白200 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂4 g/L+活性炭0.2 g/L，pH值为5.8；经过28 d的培养后获得丛生芽；

所述步骤（3）和步骤（4）中，培养条件为：温度条件为23~25 ℃、光照条件为2500 Lx、每天光照12 h、湿度为50~60%的培养室中，培养28 d。