[发明专利]一种诱导粉葛丛生芽的方法

说明书

本发明公开了一种诱导粉葛丛生芽的方法，涉及药用植物生物技术领域，包括：取粉葛藤于冬季扦插于温室中，来年的3~4月份取新发的嫩枝作为外植体；外植体在最适条件下消毒后，接种于启动培养基，诱导出无菌新芽后转入丛生芽诱导培养基中，获得丛生芽；其中所述的启动培养基中含有浓度为0.1~2.0 mg/L的NAA以及浓度为0.1~0.9 mg/L的6‑BA；其中所述的丛生芽诱导培养基中含有浓度为0.5~1.5 mg/L的TDZ以及0.1~1.0 mg/L的NAA。本发明特别优化调整粉葛丛生芽诱导培养基的组分及浓度配比，提高粉葛丛生芽的诱导率及增殖率，该方法具有培养简单、增殖系数高、再生周期短等优点。

技术领域

本发明属于药用植物生物技术领域，具体涉及到的方法是：筛选一种特定的培养基以提高粉葛丛生芽诱导率的方法。

背景技术

粉葛为豆科植物甘葛藤Pueraria thomsonii Benth.的干燥根。是一种常用中药，并且富含淀粉，是国家卫生部首批批准的药食同源两用植物。功效为解肌退热、生津、透疹、升阳止泻等，常用于治疗高血压、心绞痛、心肌梗死等，具有十分重要的药食用产业开发价值。粉葛因其独特的利用价值，被广泛的种植与利用，主要种植区域有广东、广西、湖南、贵州、云南等地，截至目前，已有四种国家地理标志的产品。粉葛种植是一项投资小、见效快、增效大的产业，全国各地陆续有许多乡镇都进行了大规模的粉葛种植。

粉葛的传统育苗方式主要有块茎繁殖、葛头繁殖、压条繁殖和扦插繁殖，目前的规模化生产中又以扦插繁殖方式为主要使用的育苗生产方式。由于长期使用，种性、品质和抗性均下降，生产效率较低，生长周期长，难以满足市场对粉葛种苗的需求。

采用组织培养技术可以达到快速生产优质种苗的目的，在无菌和人为控制的营养及环境等条件下对植物进行大规模无性繁殖。尽管有关粉葛的离体快繁已有少量报道，但污染和褐化问题严重，增殖系数低，愈伤组织难分化等都是粉葛组织培养难以实现规模化生产的瓶颈。

因此，基于以上，本发明想通过以粉葛的带节茎段为材料，用萌发出的无菌新芽直接诱导大量丛生芽，一方面可以避免愈伤诱导途径的易褐化及难分化的问题，另一方面也可以提高增殖系数，从而缩短粉葛的再生周期。

本发明人通过不同激素配比及添加物不同浓度的条件探索，结合粉葛生长的特点，发明了一种可以让粉葛大量诱导出丛生芽的培养基。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有的技术中粉葛组培苗增殖系数低的问题，通过从腋芽诱导途径中对丛生芽诱导条件的技术探索，从而提供一种极大提高粉葛丛生芽诱导率的新方法。

本发明的技术方案：

一种诱导粉葛丛生芽的方法，包括外植体材料的获取、灭菌条件的筛选、启动培养条件探索、丛生芽诱导条件探索，其特征在于：包括以下步骤：

（1）外植体获取：取粉葛藤于冬季扦插于温室中，定期浇水，来年的3~4月份，优选健壮的植株，待新长出的嫩枝带有4~5个节的时候，剪下作为外植体；

（2）灭菌条件筛选：将健壮的嫩枝放入洗洁精和84消毒液混合溶液中浸泡10 min，然后用软毛刷蘸取洗洁精水刷洗表面，特别是茎的分支处需特别清洗，之后用自来水清洗干净，再用纯水清洗一次，装入无菌瓶中；将洗好的外植体置于超净工作台上，用75%乙醇溶液浸泡30 s，无菌水清洗2次后，用0.1%升汞溶液或2%次氯酸钠溶液灭菌8~10 min，加入表面活性剂吐温80，用无菌水清洗5次；

（3）启动培养条件探索：将灭菌处理后的粉葛枝条切成1.5cm左右的带节茎段，多余部分去除，将切好的茎段接种到启动培养基中；所述启动培养基包括1/2MS、MS、B5、N6、KC培养基，同时含有浓度为0.1~2.0 mg/L的6-BA、浓度为0.1~0.9 mg/L的NAA以及含有蔗糖30g/L、琼脂4 g/L、活性炭0.2 g/L，经过28 d的培养后获得无菌新芽；