[发明专利]脐血造血干细胞保存液及其制备方法

说明书

本发明提供了一种脐血造血干细胞保存液及其制备方法，属于细胞保存技术领域，该保存液的原料包括：低分子右旋糖酐、二甲基亚砜、DMEM培养基、甘油、叶酸、甘露低聚糖和磷脂酰丝氨酸，通过原料混匀得到保存液，再经过两段变温预处理后与造血干细胞混匀，对造血干细胞进行保存。制备出的保存液保存时间长，所保存的干细胞在复苏后细胞损伤较小，干细胞的存活率较高，同时制备及保存方法较为简单、价廉。

技术领域

本发明涉及细胞保存技术领域，具体涉及一种脐血造血干细胞保存液及其制备方法。

背景技术

脐血是胎儿娩出、脐带结扎并离断后残留在胎盘和脐带中的血液，脐血中含有大量可以重建人体造血和免疫系统的造血干细胞，可用于造血干细胞移植，治疗多种疾病，同时，其采集方便、来源充足，对母婴并无不良影响，因此被广泛应用。通常，脐血造血干细胞需要进行保存，一段时间后再继续培养或临床应用。传统的脐血保存通常采用慢速冻存法，但该方法难以避免慢速降温过程中冰晶对细胞造成的损伤，因此仍需要进一步完善，同时该方法设备要求较高，设备价格也较为昂贵。为了避免冷冻条件下细胞的损伤，常常将细胞置于保存液中进行冻存。

中国专利CN201510120370.3公开了一种脐血造血干细胞分离及建库方法，该方法中冻存过程将右旋糖酐和二甲基亚砜以1:1比例混合，在4℃条件下预冷15min作为冻存液，进而使用程序降温仪降温，放入液氮中冻存，该方法简洁方便、分离成本低、分离效率高，避免了微生物污染，但该方法中使用的冻存液中含有的二甲基亚砜对细胞有一定的毒性，冻存、复苏处理不当时，可能对细胞造成较为严重的影响。

中国专利CN201710678108.X公开了一种脐血造血干细胞的冻存液，由冻存保护剂、胎牛血清、培养基组成，该培养基由基础培养基、人血清白蛋白、杨梅素、三七总皂苷、大黄素、亚油酸、胰蛋白酶、抑肽酶、光蛋白聚糖、碱性成纤维细胞生长因子、叶酸、β-巯基乙醇、黄芪多糖、转铁蛋白、维生素和氨基酸组成，使用该冻存液对脐血造血干细胞进行冻存，大大减少了冻存液对脐血造血干细胞的损伤作用，有利于脐血造血干细胞在冻存及复苏过程中细胞活力的提高，能够更好的保持脐血造血干细胞的生物学特征。但该冻存液中含有胎牛血清，通常动物来源的血清存在感染病毒病菌等病原体的风险，同时，当干细胞复苏后进行临床应用时，部分蛋白质可能会导致异源蛋白引起免疫排斥反应，进而影响患者身体健康。

针对脐血造血干细胞保存液中存在的毒性、风险性以及保存方法存在的复杂、昂贵以及对细胞易造成损伤等问题，应寻找一种保存液及其制备方法，使得使用该保存液所保存的干细胞在复苏后细胞损伤较小，干细胞的存活率均较高，同时制备及保存方法较为简单、价廉。

发明内容

本发明针对现有技术存在的问题，提供了一种脐血造血干细胞保存液及其制备方法。保存液所保存的干细胞在复苏后细胞损伤较小，干细胞的存活率均较高，同时制备及保存方法较为简单、价廉。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

本发明提供了一种脐血造血干细胞保存液，按重量份数计，包括：10-18份低分子右旋糖酐、6-18份二甲基亚砜、65-80份DMEM培养基、4-8份甘油、0.05-0.2份叶酸、0.1-0.5份甘露低聚糖和1-5份磷脂酰丝氨酸。

优选地，所述脐血造血干细胞保存液按重量份数计，包括：12-16份低分子右旋糖酐、8-15份二甲基亚砜、70-78份DMEM培养基、5-7份甘油、0.08-0.15份叶酸、0.2-0.4份甘露低聚糖和2-4份磷脂酰丝氨酸。

进一步优选地，所述脐血造血干细胞保存液按重量份数计，包括：15份低分子右旋糖酐、9份二甲基亚砜、75份DMEM培养基、6份甘油、0.1份叶酸、0.3份甘露低聚糖和3份磷脂酰丝氨酸。

优选地，所述二甲基亚砜、甘露低聚糖和磷脂酰丝氨酸的重量比范围为20-30:1:8-15。