[发明专利]一种非转基因抗除草剂油菜基因及其应用

权利要求书

1.一种非转基因抗除草剂油菜突变型基因，其特征在于，所述突变型基因仅在BnALS1基因片段的第1696位碱基由G突变为T。

2.根据权利要求1所述的非转基因抗除草剂油菜突变型基因，其特征在于，所述突变型基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

3.含有权利要求1或2所述的突变型基因编码的突变蛋白，其特征在于，所述氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

4.用于扩增权利要求1或2所述的突变型基因片段的等位特异性引物对，其特征在于，所述引物对序列如SEQ ID NO:3所示和SEQ ID NO:4所示。

5.权利要求1或2所述的突变型基因，权利要求3所述的突变型蛋白，权利要求4所述的等位特异性引物对在选育抗苄嘧磺隆植物中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述植物为油菜、拟南芥或烟草。

7.一种检测非转基因抗除草剂油菜基因的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）以待测甘蓝型油菜总DNA为模板，用权利要求4所述的等位特异性引物对进行PCR 扩增；

2）将PCR扩增的产物用限制性核酸内切酶BsrDI消化；

3）将消化的酶切产物经凝胶电泳检测，如果电泳检测的酶切产物只含有一种条带时，则为含非转基因抗除草剂油菜基因的纯合型抗性油菜；如果电泳检测的酶切产物含有三种条带时，则为含非转基因抗除草剂油菜基因杂合型抗性油菜；如果电泳检测的酶切产物含有两种条带时，则为不含非转基因抗除草剂油菜基因的纯合型敏感性油菜。

8.根据权利要求7所述的一种检测非转基因抗除草剂油菜基因的方法，其特征在于，所述步骤1）中PCR扩增反应体系如下：20 ng DNA，0.5μmol/L 引物，1×酶反应缓冲液，1.5mmol/L MgCl₂，0.2 mmol/L dNTP，0.5 U Taq酶。

9.根据权利要求7所述的一种检测非转基因抗除草剂油菜基因的方法，其特征在于，所述步骤1）中PCR扩增程序：94 ℃预变性5 min；94 ℃变性30 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸45 s，共35个循环；72 ℃延伸5 min，4 ℃保存。

10.根据权利要求7所述的一种检测非转基因抗除草剂油菜基因的方法，其特征在于，所述步骤2）中酶切反应体系：PCR产物5.0 μL，10×酶反应缓冲液2.5 μL，BsrDI内切酶0.5μL，水17.0 μL，65 ℃下反应3～5 h。