[发明专利]基于Hi-C和脂质体筛选乙肝治疗剂的方法

说明书

本发明涉及一种用于在患病对象中筛选乙肝治疗剂功效的方法，其包括以下步骤：(a)确定HBV基因的整合信息；(b)向所述对象施用用于筛选乙肝治疗剂的组合物；(c)获得包括来自所述对象的肝细胞的样品；(d)通过独特的条码识别包括多种类型的载体的肝细胞中所述至少一种治疗剂的功效；和(e)分析所述HBV基因的整合信息和所述至少一种治疗剂的功效之间的相关性；由此在患病对象中根据HBV基因的整合信息筛选乙肝治疗剂功效。通过本发明，能够提供一种能够根据HBV基因的整合信息来筛选乙肝治疗剂的方法。

技术领域

本发明涉及HBV领域，特别涉及通过确定HBV基因的整合信息从而确定受试者中的医疗状况发生风险的领域。

背景技术

乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus，HBV)感染，尤其是慢性HBV感染是全球最为重要的公共卫生问题之一(Dienstag JL.Hepatitis B virus infection.N Engl J Med2008；359(14)：1486-1500)。慢性HBV感染可导致慢性乙型病毒性肝炎(Chronic hepatitisB，CHB)、肝硬化(Liver cirrhosis，LC)和原发性肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma，HCC)等一系列肝脏疾病(Liaw YF，Chu CM.Hepatitis B virus infection.Lancet 2009；373(9663)：582-592)。据报道，目前全球约有超过3.5亿的慢性乙型肝炎病毒感染者，这些感染者最终死于HBV感染相关肝脏疾病的风险可达15％～25％，全球每年超过100万人死于此类疾病。

HBV属于嗜肝DNA病毒科的一种部分双链环状DNA病毒，目前可将HBV分为8个基因型A～H。HBV基因型具有明显的地理分布特征，基因型A主要分布于北欧、北美及非洲，基因型B和C主要分布于东亚和东南亚，基因型D呈全球分布，基因型F主要分布于中美及南美地区，基因型E、G、H分别局限于非洲、美国和中美洲。HBV感染患者的临床表现之间有很大的差异，这不仅和患者的自身情况有关，还可能与感染病毒株的基因型种类密切相关。目前已有一些关于这方面的研究报道，并得出了初步的结果。在亚洲HBV基因型以B和C为主，而严重肝病的发生与基因型C的关系比基因型B的关系更密切。HBV基因型也是影响抗病毒疗效和患者预后的一个重要因素。

乙型肝炎病毒整合入肝细胞基因组被认为是病毒诱导肝病进展的重要步骤。在乙型肝炎感染的不同阶段均可检测到HBV DNA的整合。但是与逆转录病毒的感染不同，乙型肝炎病毒的整合非病毒复制之必须，因此在乙型肝炎病毒的自然史中，其基因整合不是常规事件。大多数的乙型肝炎病毒基因整合都发生于乙型肝炎病毒感染的晚期，而在这一阶段往往已发生肝细胞的恶性转化。通常整合入宿主肝细胞基因组的HBV序列包括：BCP、EnhII、X启动子及HBx序列等，但是大多数与HBV整合的宿主序列不是与肿瘤起源密切相关的癌基因家族或抑癌家族，通过单纯的基因测序，难以判断感染HBV的患者中病毒诱导肝病进展的情况。

尽管目前市场上有很多抗HBV药物，主要通过使用干扰素或者核苷类似物进行抗病毒治疗。其中核苷类似物通过抑制HBV复制过程中的逆转录酶活性从而抑制HBV产生。逆转录酶抑制剂虽然可以使患者控制乙肝病毒水平，但是随之产生的耐药性、巨额的医药费用、药物严重的副作用等问题也不容小觑。针对HBV本身进行从头抗病毒药物研究成为一种迫切需求。想要获得从头抗病毒药物，必须先建立一种合适的药物筛选方法。

现有的乙肝药物筛选方法包括细胞水平筛选方法和动物水平筛选方法等。细胞水平筛选方法能够直观地以模型细胞为对象筛选治疗剂的抗乙肝病毒功效，然而，细胞水平实验无法全面地体现待筛选药物的实际抗病毒功效，因为其忽视了药物在治疗患者体内的实际代谢过程、肝脏靶向性以及PK/PD等因素。在细胞水平筛选获得的优异治疗剂并不一定能够在患病对象体内同样有效。