[发明专利]检测登革病毒的引物、探针、试剂盒和RT-iiPCR方法在审
| 申请号： | 201911086858.3 | 申请日： | 2019-11-08 |
| 公开（公告）号： | CN110894552A | 公开（公告）日： | 2020-03-20 |
| 发明（设计）人： | 莫秋华;杜田;郭文秀;汪海波;苏影;陈新彬;涂承宁;杨泽 | 申请（专利权）人： | 珠海国际旅行卫生保健中心(拱北海关口岸门诊部) |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/93 |
| 代理公司： | 广州嘉权专利商标事务所有限公司 44205 | 代理人： | 张志辉 |
| 地址： | 519000 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 检测 病毒 引物 探针 试剂盒 rt iipcr 方法 | ||
1.一种检测登革病毒的引物和探针，其特征在于，包括： 两条检测登革病毒的引物，其序列为 正向引物：5’-GCTYAACRYAGTKCTRACAGTTT-3’， 反向引物：5’-CTCDCGCGTTTCAGCATATTGA-3’； 一条检测登革病毒的探针，其序列为 探针：5’-ATTAGAGAGCAGATYTCTGRWRAAC-3’； 所述探针的5’端标记有荧光基团，所述探针的3’端标记有淬灭基团。
2.根据权利要求1所述的引物和探针，其特征在于，所述荧光基团为FAM、TET、HEX、CY3或JOE。
3.根据权利要求1所述的引物和探针，其特征在于，所述淬灭基团为BHQ1、BHQ2、TAMRA、DABCYL、MGB或Eclipse。
4.一种检测登革病毒的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1至3中任一项所述的引物和探针。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括四种核苷酸、阳性质控物、阴性质控物、镁离子缓冲液、反转录酶和taq DNA聚合酶，所述四种核苷酸为dATP、dGTP、dCTP和dUTP。
6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述阴性质控物为TE缓冲液或超纯水。
7.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述阳性质控物为含有SEQ ID NO.4序列的pGEM-T载体质粒。
8.一种检测登革病毒的RT-iiPCR方法，其特征在于，包括以下步骤：
提取样品RNA，在热对流PCR管中加入所述样品RNA和使用权利要求5至7中任一项所述的试剂盒，通过热对流PCR检测设备进行检测。
9.根据权利要求8所述的RT-iiPCR方法，其特征在于，所述热对流PCR管中，引物的终浓度为0.3～0.8μmol/L，探针的终浓度0.2～0.4μmol/L。
10.根据权利要求8所述的RT-iiPCR方法，其特征在于，所述RT-iiPCR方法的反应程序为：50℃反转录8～10min；95℃热对流PCR反应45～50min。
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