[发明专利]一步法合成莱鲍迪苷M的方法

说明书

本发明公开了一步法合成莱胞迪苷M的方法，包括如下步骤：(1)将能够分泌表达糖基转移酶UGT1的重组菌1和能够分泌表达糖基转移酶UGT2的重组菌2混合接种在含有甲醇的培养基中培养；(2)向步骤(1)获得的培养液中加入底物莱鲍迪苷A，加入尿苷二磷酸葡萄糖，硫酸镁或氯化镁，甲醇，反应,得到莱胞迪苷M；本发明克服了现有技术催化需要破胞、分离纯化或者加入细胞膜通透剂等繁琐步骤；本发明的原料莱鲍迪苷A相对于现有技术的价格昂贵莱鲍迪苷D做原料，价格低廉。提高重组菌糖苷转移酶的产量及热稳定性，实现直接用价值低的RebA为底物混菌催化一步法获得RebM。提高催化效率，降低酶纯化所需费用及底物的费用。

技术领域

本发明属于生物工程领域，具体地涉及一步法合成莱鲍迪苷M的方法。

背景技术

甜菊糖苷是一种从菊科草本植物甜菊叶中精提的新型天然低热量甜味剂甜菊糖苷类化合物，因其甜度高、热量低、无毒性、耐高温、耐酸碱和水溶性好等优点，被美国食品药品监督管理局认证为安全，可应用于食品行业^[1-5]。莱鲍迪苷M(Rebaudioside M，RebM)具有更好的口感特性，但其占叶子干重的含量小于0.1％，导致分离成本高、价格昂贵。生物催化法获得高浓度的RebM已引起了学者的关注。目前报道，来源甜叶菊的重组酶能催化RebD生成 RebM，但产量较低^[3-4]。

以RebD为底物、通过生物催化法可获得RebM，但其生物催化过程中，目前主要有以下几种问题：(1)生物催化需要高效的糖基转移酶，在植物中糖基转移酶含量很低，远达不到实际应用的水平，而且难于纯化；(2)胞内表达的重组糖基转移酶能催化RebD产物RebM的生成、但RebD在甜菊中含量也低于0.1％且也价格较高；(3)胞内表达生产的重组酶需要离心收集菌体破胞等过程才能进行催化，步骤繁琐；(4)在反应过程中，由于热抑制作用，糖基转移酶大部分活性会丧失。(5)重组菌获得重组酶、酶的制备及催化耗时耗力耗财^[3-9]。基于上述研究现状、亟需一种：价格低廉、产量大的底物及步骤少、快速有效、低成本的方法去获得莱鲍迪苷M。

这种技术也将是实现工业上生物催化制备RebM的可行途径。

参考文献：

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