[发明专利]一种调制乳粉中维生素K1

权利要求书

1.一种调制乳粉中维生素K₁和维生素K₂含量的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)采用酶解、皂化的方式提取待测调制乳粉中的维生素K₁和维生素K₂，得到样品提取液；

(2)采用柱后锌粉还原-高效液相色谱-荧光检测方法，对所述样品提取液中维生素K₁和维生素K₂进行检测，得到液相色谱数据；

(3)根据维生素K₁和维生素K₂的液相色谱标准工作曲线，得到待测调制乳粉中维生素K₁和维生素K₂的含量；

步骤(1)包括：避光条件下，将待测调制乳粉经脂肪酶酶解，氢氧化钠-乙醇皂化，正己烷萃取，氮吹浓缩，甲醇复溶，有机滤膜过滤，得到样品提取液；

步骤(2)的色谱条件如下：

色谱柱：C18色谱柱；柱后锌粉还原柱；

流动相：含0.03％冰乙酸、1.5g/L氯化锌和0.5g/L无水乙酸钠的甲醇溶液；

流速1.0mL/min；

进样体积10μL；

柱温35℃；

步骤(2)中，荧光检测器的激发波长为326nm，发射波长为432nm。

2.根据权利要求1所述的调制乳粉中维生素K₁和维生素K₂含量的测定方法，其特征在于，酶解过程中，待测调制乳粉与脂肪酶的质量比为1：(0.3-0.4)，酶解时间在4h以上。

3.根据权利要求1所述的调制乳粉中维生素K₁和维生素K₂含量的测定方法，其特征在于，皂化过程中，在酶解后样液中加入NaOH溶液，涡旋30s后，再加入无水乙醇皂化3-8min，其中，NaOH溶液的浓度为2-3mol/L。

4.根据权利要求1所述的调制乳粉中维生素K₁和维生素K₂含量的测定方法，其特征在于，萃取过程中，使用正己烷萃取两次，饱和NaCl溶液水洗1次。

5.根据权利要求1所述的调制乳粉中维生素K₁和维生素K₂含量的测定方法，其特征在于，步骤(1)包括：称取2.5g待测调制乳粉于50mL离心管中，加入0.8g的脂肪酶，用10mL温水溶解，涡旋混匀，于37℃±2℃恒温水浴震荡，酶解4h后，得到酶解后样液；在所述酶解后样液中加入1mL 2.5mol/L的NaOH溶液，涡旋30s后，再加入10mL无水乙醇，混匀皂化5min，得到皂化后样液；在所述皂化后样液中加入10mL正己烷，涡旋提取5min，6000r/min离心3min，移取上层正己烷层于另一个50mL离心管，再加入10mL正己烷萃取一次，合并提取液，用10mL饱和氯化钠溶液水洗有机相后氮气吹干，用甲醇2mL复溶，过0.22μm有机滤膜，得到样品提取液。