[发明专利]一种干细胞的冷冻液及其冷冻方法

权利要求书

1.一种干细胞的冷冻液及其冷冻方法，包括培养液与冷冻液，其特征在于，所述培养液为DMEM/F12培养液，所述冷冻液包括二甲基亚砜、总黄酮、土豆粉提取物、人血清白蛋白、樱桃提取物、棕榈油提取物、小牛血清、海藻糖、链霉素和胰蛋白酶；

所述DMEM/F12培养液的百分比组成为40-60％；所述各冷冻液的百分比组成为：二甲基亚砜30-50％，总黄酮10-20％，土豆粉提取物5-10％，人血清白蛋白4-9％，樱桃提取物12-18％，棕榈油提取物3-7％，小牛血清1-7％，海藻糖5-15％、链霉素2-4％和胰蛋白酶3-8％。

2.根据权利要求1所述的一种干细胞的冷冻液及其冷冻方法,其特征在于，所述土豆粉提取物所需要的主要成分为葡萄糖。

3.根据权利要求1所述的一种干细胞的冷冻液及其冷冻方法,其特征在于，所述樱桃提取物所需要的主要成分为铁离子。

4.根据权利要求1所述的一种干细胞的冷冻液及其冷冻方法,其特征在于，所述棕榈油提取物所需要的主要成分为为甘油。

5.根据权利要求1所述的一种干细胞的冷冻液及其冷冻方法,其特征在于，所述DMEM/F12培养液的百分比组成为40％；所述各冷冻液的百分比组成为：二甲基亚砜30％，总黄酮10％，土豆粉提取物5％，人血清白蛋白4％，樱桃提取物12-％，棕榈油提取物3％，小牛血清1％，海藻糖5％、链霉素2％和胰蛋白酶3％。

6.根据权利要求1所述的一种干细胞的冷冻液及其冷冻方法,其特征在于，所述DMEM/F12培养液的百分比组成为45％；所述各冷冻液的百分比组成为：二甲基亚砜35％，总黄酮13％，土豆粉提取物7％，人血清白蛋白6％，樱桃提取物14％，棕榈油提取物4％，小牛血清2.5％，海藻糖7％、链霉素2.5％和胰蛋白酶4％。

7.根据权利要求1所述的一种干细胞的冷冻液及其冷冻方法,其特征在于，所述DMEM/F12培养液的百分比组成为50％；所述各冷冻液的百分比组成为：二甲基亚砜40％，总黄酮14％，土豆粉提取物8％，人血清白蛋白7％，樱桃提取物15％，棕榈油提取物5％，小牛血清4％，海藻糖10％、链霉素3％和胰蛋白酶5％。

8.根据权利要求1所述的一种干细胞的冷冻液及其冷冻方法,其特征在于，所述DMEM/F12培养液的百分比组成为55％；所述各冷冻液的百分比组成为：二甲基亚砜45％，总黄酮17％，土豆粉提取物8％，人血清白蛋白8％，樱桃提取物18％，棕榈油提取物6％，小牛血清5.5％，海藻糖12％，链霉素3.5％和胰蛋白酶7％。

9.根据权利要求1所述的一种干细胞的冷冻液及其冷冻方法,其特征在于，所述DMEM/F12培养液的百分比组成为60％；所述各冷冻液的百分比组成为：二甲基亚砜50％，总黄酮20％，土豆粉提取物10％，人血清白蛋白9％，樱桃提取物18％，棕榈油提取物7％，小牛血清7％，海藻糖15％、链霉素4％和胰蛋白酶8％。

10.一种干细胞的冷冻方法,其特征在于，包括以下步骤：

步骤一，将脂肪组织块进行消毒处理，切块清洗赶紧，之后使用离心机进行离心处理，离心专转速为1000-1500r/min，时间为5-10分钟；

步骤二，将组织块放入至消化酶中进行处理，处理时间为10-30分钟，之后将组织块过滤后，加入DMEM/F12培养液中，然后对得到的细胞进行清洗，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，最终获得细胞上悬液；

步骤三，将细胞悬液放入至培养皿中，在将培养皿放入至培养箱中培养，保温箱的温度保持在37℃，保温时间为24小时，每隔24小时，再接种于培养容器进行培养，此后每2-3天换液一次，直至融合率达到80-90％为止；

步骤四：将步骤三所得干细胞中分别装入冻存管中，且每只中计入细胞冷冻液并置于液氮中冷冻，备用，冻存的降温速率为-5～-10℃/min。